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[求救] 有關蛋白表達

看板Biotech (生命科學)作者 (我和你走散了。)時間10年前 (2015/04/22 23:56), 編輯推噓1(1推 0噓 7→)
留言8則, 4人參與, 最新討論串1/1
最近做蛋白表達 使用PET32a質體並以E coli.(BL21)做transform 分別用IPTG和lactose做誘導 IPTG部分: 大概在OD值0.6時加入0.5mM的IPTG 以37度繼續培養 加入後發現細菌幾乎就不再生長了 跑膠結果也發現蛋白沒有表達出來 lactose部分: 分別以28度和27度培養18小時 菌正常生長 但跑膠結果發現蛋白沒有表達出來 無法確定這蛋白是否為毒蛋白 因為此蛋白相關文獻極少 但加了IPTG後會抑制菌的生長 所以也懷疑此蛋白是否會毒殺菌 如果真的會毒殺菌 大概要怎麼調整條件才有可能解決這方面的問題呢 至於lactose誘導則是因為相關資訊不多 不知道有沒有人有相關的經驗可以分享 謝謝:) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 220.136.73.220 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1429718194.A.20F.html
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04/23 00:20, , 1F
加入IPTG做誘導就是告訴細菌別管複製了,要專心做蛋白阿
04/23 00:20, 1F
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04/23 00:37, , 2F
會不會是做蛋白的溫度不適合呢？
04/23 00:37, 2F
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04/23 00:38, , 3F
之前同事做過有毒性的蛋白是換系統才成功的
04/23 00:38, 3F
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04/24 02:21, , 4F
上面可有可辨認的 fanctional domain(s)？重覆序列的 a.a.?
04/24 02:21, 4F
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04/24 02:22, , 5F
再要不然就是 Arginine(s) 的比例太多？膜蛋白？
04/24 02:22, 5F
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04/24 02:23, , 6F
另外，加了 IPTG，理論上不會再讓細菌分裂，但通常會多長些
04/24 02:23, 6F
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04/24 02:25, , 7F
還有就是有確認construct出來的没有意外的 out-of-frame 嗎?
04/24 02:25, 7F
推
04/26 16:22, , 8F
IPTG induce的時間多長？菌長的慢正常
04/26 16:22, 8F
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