[求救] PCR & running gel

看板Biotech (生命科學)作者 (GluR1)時間10年前 (2015/04/27 04:48), 編輯推噓1(106)
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想請問各位一個關於 PCR 的問題, 就是我最近想要 clone 一個基因,分成兩段 PCR, 就是先用一組 primers (e.g. pF1 & pR1) PCR 前 1.5kb, 然後用另一組 primers (e.g. pF2 & pR2) PCR 後面 1.5kb, 再把兩個 PCR products 當作 template,用 pF1 & pR2 PCR 全長, 結果跑 gel 後出現照片中紅框框的結果。 http://imgur.com/JiRO3bB
請問這是什麼情況呢? 很久以前做有出現過類似的情形, 記得那時候用 PCR purification 後好像變成 band 不見了, 還是沒改善,一樣卡在 well,有點忘了。 那時候沒找出問題出在哪, 沒想到現在又碰到這個情況, 所以想請問一下有沒有人知道什麼情形下會卡在 well 中, 感謝。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 24.85.237.226 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1430081283.A.31C.html

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會不會是序列太長呢?
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04/28 16:47, , 2F
taq大概是跑到出來長到會卡well的product...
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但是另一個更長的不會出現這個情況,似乎只會發生在 sewin
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g PCR,把兩段合在一起時後這樣,如果是一次 PCR 3kb 就
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不會卡 well。
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是否知道如何讓 Taq 不卡呢?之前有想過這個可能性,但不
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知如何解決。
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文章代碼(AID): #1LFKy3CS (Biotech)
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