[求救] EMSA卡well

看板Biotech (生命科學)作者 (阿揚~)時間10年前 (2015/05/04 15:58), 編輯推噓1(106)
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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等)之分讓, 請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作 簽署材料分讓協議(MTA),否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 請問各位大大, 我目前在做EMSA 實驗, DNA 22bp, protein 200 kD 目前跑出的圖 http://imgur.com/1lJZLCL
DNA 拖尾已經解決, 但是一直困擾我的是 右側 隨著protein濃度變高 shift程度越明顯, 可是都卡well 感覺是有binding, 但卡well不一定是因為binding 不知道有沒有什麼辦法 能夠解決 卡well的情形 目前試過 5% PAGE, 8% PAGE, 1.5% agarose 都會卡 請求解答 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.130.20 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1430726308.A.A94.html

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要不要算一下 Protein 的帶電值是多少?帶正電跑不下去是正
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常的啊。另外,protein 容易multimerized也是可能原因。再來
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就是 protein aggregation 問題也要排除。還有就是依protein
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pI 值來調整電泳時的 buffer pH value。
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對了,我還有見過調整acryamide比例的 protocol,不一定都一
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直是 29:1 的混合比例。你要不要再調高?
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09/01 22:49, , 7F
電壓?跑多久?
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文章代碼(AID): #1LHoQagK (Biotech)
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