[求救] 以染GUS法染菌確認有無轉型成功

看板Biotech (生命科學)作者 (咦!?有殺氣)時間10年前 (2015/06/04 13:53), 編輯推噓1(109)
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大家好 小弟最近實驗室遇到轉植株相關問題 想問一下有沒有人有直接對E. coli染GUS (B-glucuronidase) 過? 可否用這種方式確認有無轉型成功呢? 雖然我知道E. coli本身就帶有gus gene, 所以不管有沒有吃目標基因,都會有gus反應出現 但有沒有品系(或廠牌)的勝任細胞可特別針對外援轉入的gus基因 做轉型成功確認呢? ---------------------------------------------------------- BTW,以前學生物技術時就有遇到這個問題過 http://juang.bst.ntu.edu.tw/BCT/Chapters/Chap2-2.htm a. 前一天進行轉形後,為何不直接將菌液塗抹在含有 IPTG 的培養基? b. gus 基因原本就存在 E. coli 中,難道宿主菌株不會產生 GUS? 想看看大家的經驗 發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等)之分讓, 請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作 簽署材料分讓協議(MTA),否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.99.150 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1433397235.A.318.html

06/04 14:07, , 1F
何謂染gus? western嗎?
06/04 14:07, 1F

06/04 14:55, , 2F
transfect?
06/04 14:55, 2F

06/04 16:49, , 3F
GUS gene的受質是 x-gluc ,而藍白篩常用的是x-gal, 不知
06/04 16:49, 3F

06/04 16:49, , 4F
道是您是否有搞錯 ?
06/04 16:49, 4F

06/04 17:07, , 5F
BCT講義當中,已經將GUS基因從pSK搬到pQE載體囉~
06/04 17:07, 5F

06/04 17:11, , 6F
pQE是表達蛋白常用的載體,IPTG可用來誘導T5 promoter
06/04 17:11, 6F

06/04 17:57, , 7F
原po好像沒提到x-gal,有提到IPTG也是為了在pQE誘導GUS表現
06/04 17:57, 7F

06/04 18:26, , 8F
前一天轉形,要是使用 IPTG,純粹没事找事。這時候要做的是
06/04 18:26, 8F

06/04 18:28, , 9F
要確認有無轉形成功,一般使用其他篩選手段,像是抗生素等等
06/04 18:28, 9F

06/04 18:35, , 10F
呃,除非你想要使用藍白篩選法等方式,需要引誘表現蛋白質
06/04 18:35, 10F
文章代碼(AID): #1LR-VpCO (Biotech)
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