[討論] Gal4/UAS 系統中 UAS 的位置
我是做斑馬魚的
最近想做 Gal4/UAS 的 transgenic fish
原則上是採用 Tol2kit
http://tol2kit.genetics.utah.edu/index.php/Main_Page
以 three-insert multisite Gateway cloning 建構 plasmid
(insert 1: UASx10, 2: coding region 3:poly-A signal)
其實也不算難
但是老闆想要更快，說不妨直接合成需要的序列丟進 destination vector
這樣做更輕鬆 老闆肯花錢我當然是爽
可是可是，問題來了：
標準的 three-insert gateway cloning 出來的結果，
insert 跟 insert 間當然會夾一些剩餘的 recombinate site 之類的東西
（以我的目的來說就是 UASx10 跟 coding region 之間）
合成的 DNA 序列當然可以沒有這些 construction 的殘骸
但我卻擔心 UAS 跟 coding region 之間是否其實是需要一點距離的？
另外我的理解是一般的 promoter 已經內含 transcription start site (TSS)
但是 UAS 是 enhancer, 那麼 UAS 之後還需不需要外加 TSS 呢？
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