[求救] Q-PCR primer秀逗?

看板Biotech (生命科學)作者dorisaq2791 (dorisaq2791)時間10年前 (2015/07/11 19:59)推噓3(3推 0噓 4→)

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實驗室跑qpcr是使用step one這台機器原本都跑得很順，有一次突然發現某個基因(代稱A-1)跑了兩次都是undetected 用別人的primer就跑得出來了。 ps:我們訂的primer是已經煮好的，常溫配送到實驗室，稀釋就可直接用了。看個人習慣保存於4度或著-20度，這一陣子太常跑qpcr，我都放4度(我知道長期來看不好，不過這裡我只是想強調我用的幾組primer保存條件都一樣) 疑點如下: 1.別人的primer也是從同一管stock分裝出來的 2.即使從原管重新再分裝一次還是跑不出來 3.那天跑的幾個基因，保存條件完全一樣，但只有這個有問題 4.那管stock就這麼壞了，不過先前分裝給別人的都沒有事那一次是重訂新的primer解決的，原本以為是偶發事件，直到第二次發生。不同的地方如下： 1.基因不同(不過互相是次單元體關係，代稱為A-2) 2.第一次分裝曾重覆使用eppendorf(所以上次以為可能是汙染之類導致)，可是這次這個primer只分出這一管，原管stock就只開過第一次分裝，因為出問題，才再打開這個stock，分裝出來還是gg(這次都用新的eppendorf)。想問是不是單純保存問題還是我有其他沒想到的地方?因為A-1我有兩個序列是同時訂來測試的，也都放4度，可是他沒壞，而且壞掉這兩個primer都不是反覆離開冰箱最多次的。這次很果斷的一發現就先訂新的primer(果然立馬解決)，但是還是想知道原因。拜託各位大大了!! 萬分感謝。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.113.185.111 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1436615967.A.96A.html