[求救] 冷凍切片的腦組織貼片

看板Biotech (生命科學)作者 (用三隻手指托腮)時間10年前 (2015/07/16 17:24), 10年前編輯推噓11(11013)
留言24則, 9人參與, 最新討論串1/1
各位前輩好! 因為我是在新成立的部門受訓,冷凍切片這一方面只有兩天的實作經驗就上場練習了 肌肉和肺我切的效果還不錯,但是在腦組織就遇到了大問題,不管怎麼貼片,就是很容易 產生氣泡或是皺摺...... 問過廠商、醫檢師和其他助理,終於從完敗進步到成功率約兩百分之一..... 其他的貼片簡直是慘不忍睹...... 想請問有沒有這方面的高手可以指引一下,該如何貼片才能夠減少氣泡和皺摺的產生呢? 我是使用蔗糖濃度梯度脫水,在30%時脫水兩次才進行包埋的。 先謝謝看完文章的各位了! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.246.217.81 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1437038691.A.23D.html

07/16 20:16, , 1F
不要完全切斷, 讓切好的切片回到檢體上, 用毛刷整平再貼
07/16 20:16, 1F
有喔,這些都有做到,可是很難貼平..我會繼續練習的!

07/16 23:29, , 2F
看你要不要弄成floating 就是先把sample泡進PBS在貼回來
07/16 23:29, 2F
意思是把sample溶掉,重新泡PBS一段時間後再用OCT包埋嗎?

07/17 10:42, , 3F
收腦的時候有perfusion嗎
07/17 10:42, 3F
有,我主要是看肝臟變成土黃色的時候就開始收組織了,以PBS灌流後直接取組織放在10% 的福馬林中 ※ 編輯: ifam (27.246.217.81), 07/17/2015 11:19:13

07/17 13:14, , 4F
換糖水之前你福馬林泡多久?
07/17 13:14, 4F
24h

07/17 15:08, , 5F
不是喔 我是指你把切片切下來先丟PBS 再貼片 可能會比較
07/17 15:08, 5F

07/17 15:08, , 6F
不會皺 所以貼合效果比較好
07/17 15:08, 6F
請問是丟到1X的PBS嗎?可是這樣oct溶掉沒有關係嗎?

07/17 16:48, , 7F
對不起 我想錯了 因為我之前做腦切片是用agarose包起來
07/17 16:48, 7F

07/17 16:48, , 8F
用microtome切 不好意思我說錯了
07/17 16:48, 8F
難怪XD...因為我剛剛疑惑的試做了一次,結果切片ㄧ離開機器就溶掉了,連檢體都融化 了,正要上來繼續請教您的呢 不過還是謝謝你好心的提供意見喔! 繼續請教各位前輩貼片的手法,拜託拜託了! ※ 編輯: ifam (27.246.217.81), 07/17/2015 16:52:59

07/17 17:06, , 9F
eric2853的方法我有看過,一樣是OCT包埋.不過這比較適合
07/17 17:06, 9F

07/17 17:07, , 10F
切比較厚的情況,好像要20um或30um以上.所以你如果要5um
07/17 17:07, 10F

07/17 17:08, , 11F
左右的冷切比較不適合.
07/17 17:08, 11F

07/17 17:11, , 12F
原PO可以試試看PBS灌流後再用福馬林灌流.然後福馬林泡久點
07/17 17:11, 12F

07/17 17:13, , 13F
再換糖水. 我試過灌流PBS再加福馬林.然後24H換糖水.
07/17 17:13, 13F

07/17 17:14, , 14F
也試過完全不灌流. 腦取下來後泡福馬林至少三天才換糖水.
07/17 17:14, 14F

07/17 17:16, , 15F
這兩種方式下來後,切片機開-20度.切3~5um左右還算平整.
07/17 17:16, 15F

07/17 17:19, , 16F
攤腦組織片時也不太麻煩. 很容易就很在玻片上攤平.
07/17 17:19, 16F

07/18 11:50, , 17F
OCT包埋還是可以用floating 我都是這樣用的
07/18 11:50, 17F

07/19 23:32, , 18F
貼片的時候,以15-20度斜度快速拉起來
07/19 23:32, 18F

07/21 22:36, , 19F
原po在哪個單位? 以前冷凍切片切腦或切骨頭都OK~
07/21 22:36, 19F

07/21 22:37, , 20F
若可以現場看的話,會比較知道你的問題在哪裡~~
07/21 22:37, 20F
因為是新成立的部門,我也很菜,可能比較不方便讓外賓進出。但若是您願意提供作法( 前處理)或是其他意見,我會很謝謝你的!

07/22 06:15, , 21F
嗯 歡迎站內信
07/22 06:15, 21F
※ 編輯: ifam (27.240.55.167), 07/23/2015 11:33:14

08/01 01:06, , 22F
PBS灌流後會再福馬林灌流,再用福馬林浸泡overnight,surcos
08/01 01:06, 22F

08/01 01:06, , 23F
e脫水,OCT包埋前記得把腦上的液體用乾,讓包埋效果更完整,
08/01 01:06, 23F

08/01 01:06, , 24F
切片時候腦片會更完整,更容易貼片
08/01 01:06, 24F
文章代碼(AID): #1LftXZ8z (Biotech)
文章代碼(AID): #1LftXZ8z (Biotech)