RNA stability 測試
各位大大們好
最近小弟的實驗開始做到mRNA stability的測試
主要的實驗策略就是將Actinomycin D加入MCF7細胞中抑制mRNA生成
然後受各個時間點的RNA來做qPCR
來觀察RNA降解的情形
小弟有幾點細節不太了解所以想來釐清下
1.是細胞剛Seeding完就可以加入Actinomycin D，還是要等細胞都貼附
，隔天在加藥???
2.加入Actinomycin D之後大概是要等多久開始收RNA呢???
3.在小弟以往的實驗中在上qRT-PCR之前是一定要把所有RNA sample的濃度和量
調成一致，跑完qPT-PCR之後也會把每個RNA的Ct去對GAPDH mRNA的Ct去做校正，
目的就是為了讓每個RNA sample是在相同的量下作為基準才能真正比較出在不同
condition下RNA表現量的差異，那這樣的話在RNA stability的實驗中，每個時間
點的total RNA的表現量理論上來說應該是會隨著時間的增加而減少才對，所以
這樣的話把每個時間點的RNA收下來之後要把大家的量調成一致在上qRT-PCR嗎???
跑完之後來要對GAPDH進行校正嗎???
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