[討論] talon 純化蛋白

看板Biotech (生命科學)作者 (monicatsen)時間10年前 (2015/08/22 18:49), 編輯推噓1(104)
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嗨 大家 想要跟大家請教一下 我最近在做純化蛋白 利用E.coli的system 再用talon的resin純化 his tag protein 但因為我們家沒有gel filtration的儀器 所以我純化完後就直接用amicon的濃縮管濃縮去除離子 接著 用濃縮完的產物做in vitro demethylation 原本是預期沒有作用(當negative control,沒有催化活性的domain) 但今天測試居然能夠demethylation 可能是純化沒做gel filtration 導致蛋白不夠純造成的嗎? 還是 我的蛋白真的能夠demethylation? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.81.93.123 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1440240540.A.749.html

08/23 00:33, , 1F
我第一個懷疑的是construct。是點突變成的domain嗎?
08/23 00:33, 1F

08/23 01:51, , 2F
試試看讓 E.coli transform 沒有表現蛋白的質體或是表
08/23 01:51, 2F

08/23 01:52, , 3F
現 EGFP 之類的質體,然後做一樣的純化步驟,看產物能
08/23 01:52, 3F

08/23 01:53, , 4F
不能一樣產生 demethylation 就知道是不是純化不夠了。
08/23 01:53, 4F

08/23 15:24, , 5F
懷疑不夠純 先跑片sds page吧
08/23 15:24, 5F
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