[求救] CHX與Protein stability assay
各位版友大大們好
小弟我最近實驗要去測試某Non-coding RNA對某Protein stability的影響
實驗設計主要是藉由加入了CHX這個藥物之後抑制translation的進行
之後收各個時間點的protein然後跑western
藉此來看target protein的降解現象
然而我現在遇到的問題是
我CHX藥物劑量從1提高到10ug/ml
時間點收到24h
我要看的target protein似乎沒有甚麼影響
我的細胞(MCF7)感覺也好好的沒有甚麼大量凋亡的現象(理論上來說細胞的轉譯活動
抑制了應該漸漸會有細胞活不下去吧...)
跟老闆討論 老闆覺得CHX可以在增加 不然就是把收的時間點拉長
可是我查paper
好像幾乎沒看到有CHX加超過10ug/ml的
有沒有人收超過24h
還是說是CHX沒有work?(可是CHX是新買的)
我的CHX是溶在酒精裡 4度C保存
我要看的Protein是NDRG1 Paper上做過類似的實驗的時間點是到8h就有效果
CHX也只加5ug/ml
所以我的問題到底出在哪咧?
有請各位大大們小弟解惑了
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.121.119
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1448524833.A.DC4.html
→
11/26 16:12, , 1F
11/26 16:12, 1F
→
11/26 16:13, , 2F
11/26 16:13, 2F
→
11/26 20:07, , 3F
11/26 20:07, 3F
→
11/26 22:47, , 4F
11/26 22:47, 4F
→
11/27 15:49, , 5F
11/27 15:49, 5F
→
11/27 15:49, , 6F
11/27 15:49, 6F
推
11/27 18:14, , 7F
11/27 18:14, 7F
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章