[求救] 請問用Flow測鈣離子切細胞的方法?

看板Biotech (生命科學)作者 (戰鬥小雞)時間9年前 (2015/12/03 18:12), 編輯推噓2(2013)
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各位大大好 小弟我在做有關藥物影響細胞內鈣離子濃度的研究 除了用螢光顯微鏡外還需要使用到Flow Cytometer 細胞是是初級培養的心肌細胞 給予藥物48小時後分別染Flou-3 AM以及Rohd-2 AM 所有的溶液都同時用含有鈣離子和藥物去做染色和Wash的動作 但是上機的時候測出來的數值都有時上升有時沒有 我和老師都懷疑是因為trypsin的關係 因為我們用的是0.25%Trypsin+含有EDTA的HBSS中 有試著將2mM的CaCl加入trypsin但是效果好像也沒比較好 請問有人有經驗可以幫忙嗎? 或是推薦可以切細胞而且含鈣離子的酵素 感謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 118.163.43.185 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1449137578.A.AAF.html

12/03 18:49, , 1F
EDTA會抓鈣離子 應該說是抓2價離子
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12/03 18:50, , 2F
不過還是要看濃度大小是否會影響到你的實驗
12/03 18:50, 2F

12/03 19:41, , 3F
我知道EDTA會抓,想說是否考慮直接自己配有鈣的Trypsin
12/03 19:41, 3F

12/04 01:01, , 4F
(單純想問)為什麼要加 trypsin?
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12/04 08:54, , 5F
因為染完要把細胞切下來離心呀!
12/04 08:54, 5F

12/04 12:25, , 6F
細胞內鈣離子會受到trypsin影響嗎??(純發問)
12/04 12:25, 6F

12/04 14:47, , 7F
因為我買的trypsin是溶在無鈣的HBSS中外加了EGTA,基本上
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12/04 14:48, , 8F
是Ca2+ free的環境
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12/05 00:18, , 9F
我的意思是,你是測細胞內鈣離子,而trypsin/EDTA是作用於
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12/05 00:18, , 10F
細胞「外」,為什麼會覺得trypsin/EDTA會影響細胞「內」鈣
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12/05 00:18, , 11F
離子?另外,應該有無EDTA的trypsin可以買,真擔心就換掉吧
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12/05 02:07, , 12F
EGTA抓鈣不是更強嗎?
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12/05 22:49, , 13F
我的心肌細胞處在無鈣環境的時候,在螢光動態偵測是看不到
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12/05 22:51, , 14F
內鈣的波動的,所以我推測用了trypsin後會影響到我的結果
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12/05 22:52, , 15F
之後會考慮試試不含EDTA的trypsin!
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文章代碼(AID): #1MO1Mggl (Biotech)
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