Re: [求救] Culture medium western
SDS-PAGE 樣品局部過濃現象，想像一下一個2M窄窄的走道給大家跑步，但是光胖子
就有100人之譜，當然塞車阿，所以會歪七扭八的。
想辦法把 medium 中 FBS 來源的 albumin 去除，試試看 centtricon 吧。
另外複雜樣品不建議用ELISA，是不是亂黏你看不出來，如果亂黏造成假訊號又要浪
費時間。
※ 引述《tynse71864 (TATA box)》之銘言：
: 大家好
: 我的實驗想看在culture medium (10%FBS) 裡
: overexpress的 target protein 有多少被secret出來
: 因此目前的做法是
: 直接收mediumm，loading 約1/500下去做western
: western壓的到我要看的protein(16~17kda) 但是極醜....
: http://0rz.tw/UMKNU
: 由於medium中有很多BSA / IgG / lipid雜七雜八的東西
: 所以跑的時候會大扭曲
: 目前沒有考慮做elisa (因為secretion的量很多
: 抗體也無法做IP
: 因此想知道有無方法 可以處理這樣子的sample
: 讓western不會跑歪
: 目前有想到的方法是:
: 1.Dilute sample，取更少的量
: (但因為之後要做endogenous，我怕之後此方法會不能用
: 2.加一些detergent進去 (?) 如SDS
: 查過的paper都只有寫 load medium，不太會寫怎麼處理
: 想問有無類似經驗的版友們可以分享經驗呢?
: 謝謝!
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