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[求救] SDS-PAGE 跑到剩1/3卡住下不去

看板Biotech (生命科學)作者 (冰酒瓶子)時間8年前 (2016/03/18 20:58), 8年前編輯推噓20(20推 0噓 41→)
留言61則, 20人參與, 最新討論串1/1
http://imgur.com/JmRzpQ7
如圖 抱歉照片不是很清楚 總之最近實驗室同仁的PAGE一直出狀況 據他們說以前用相同的program可以跑到底 可是最近跑都會停在大約剩下1/3的地方 有時候甚至會停在一半的地方 PAGE在使用之前都看不出異狀 剛跑完在停止的地方看起來有像摺痕的感覺 可是放了一段時間這個"摺痕"就消失了 實驗室的PAGE一直都是要用才配的 他們用很兇所以不會有擺太久的問題 因為我平常沒有在做這個實驗所以實在幫不上忙 請問板大們有沒有想到甚麼可能的原因會造成這種情形? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.225.23.192 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1458305891.A.BEA.html
推
03/18 21:04, , 1F
buffer有沒有加好加滿？
03/18 21:04, 1F
有喔!而且不同人做都有這個狀況... ※ 編輯: huuban (36.225.23.192), 03/18/2016 21:06:46
→
03/18 21:12, , 2F
前兩周我們實驗室才這樣子
03/18 21:12, 2F
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03/18 21:12, , 3F
換了Tris電壓穩定了就好了
03/18 21:12, 3F
→
03/18 23:23, , 4F
跑一半其實buffer漏光？還有跑膠時，是定電流還是電壓，
03/18 23:23, 4F
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03/18 23:23, , 5F
有可能電流不足，也有可能running buffer reuse太多次，
03/18 23:23, 5F
→
03/18 23:23, , 6F
跑一半黏這麼緊，也有可能是1.5M tris-base pH有問題
03/18 23:23, 6F
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03/19 00:17, , 7F
電流出問題了 ！檢查電源供應看看 ！
03/19 00:17, 7F
推
03/19 13:09, , 8F
電流
03/19 13:09, 8F
謝謝板大們的熱烈回應QQ 其實有換過供電器，可是沒有救QQ 電泳槽有好幾個，所以他們也不認為是電泳槽的問題 running buffer沒有reuse，前陣子剛買新的，或許buffer有問題? ※ 編輯: huuban (118.161.239.34), 03/19/2016 16:40:09
推
03/19 17:00, , 9F
可能是新buffer喔..泡電泳下面有鹽晶析出嗎?
03/19 17:00, 9F
我再問問他們..!!
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03/19 17:19, , 10F
如果是電流或機器,怎麼解釋只跑一半後就不跑的？
03/19 17:19, 10F
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03/19 17:22, , 11F
跑一半才不動,比較是pH值改變導致帶負電protein無法被帶動
03/19 17:22, 11F
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03/19 17:27, , 12F
包括gel或buffer因為溫度偏高導致pH降,像stacking一樣停滯
03/19 17:27, 12F
推
03/19 20:34, , 13F
供電器有設定電阻或是電壓多少數值為上限嗎?
03/19 20:34, 13F
推
03/19 20:36, , 14F
覺得blence大講的還蠻有道理 pH值變化...
03/19 20:36, 14F
通常是定電壓
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03/19 21:44, , 15F
配膠的tris buffer， ph值測一下
03/19 21:44, 15F
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03/19 22:31, , 16F
除了單純的pH跑掉,配Tris時往來回調,或拿錯Triz導致NaCl
03/19 22:31, 16F
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03/19 22:36, , 17F
產生,就會虫造成溫度過高,畢竟SDS-PAGE不好有鹽離子存在
03/19 22:36, 17F
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03/19 22:38, , 18F
之前有買過黑心buffeer, 跑一跑well內都會有鹽巴析出...
03/19 22:38, 18F
→
03/19 22:39, , 19F
結果是廠商不會配, buffer內因滴定太多離子導致根本不能用
03/19 22:39, 19F
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03/19 22:40, , 20F
如果只注意pH有無變化,可能會忽略這部分
03/19 22:40, 20F
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03/20 00:35, , 21F
PH跑掉吧 不然就是buffer裡長太多有的沒的微生物XD
03/20 00:35, 21F
微生物太可怕了...!!
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03/20 00:37, , 22F
感覺整個buffer stock
03/20 00:37, 22F
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03/20 00:38, , 23F
-->和working solution的配置有問題。
03/20 00:38, 23F
推
03/20 02:11, , 24F
會不會是內層漏了？裡面有沒有夾緊？
03/20 02:11, 24F
有漏的話應該會注意到 通常架完都會等一陣子看有沒有漏
推
03/20 03:22, , 25F
蛤大家 bfr都用買的喔
03/20 03:22, 25F
以前都用配的，後來用量大新人問題又多就放棄了(炸
推
03/20 07:36, , 26F
這10x buffer常有特價咩 買回來省事不用在那邊配個老半天
03/20 07:36, 26F
→
03/20 07:36, , 27F
三不五時就得回來看tris溶了沒 orz
03/20 07:36, 27F
※ 編輯: huuban (118.161.239.34), 03/20/2016 16:19:51
推
03/21 00:21, , 28F
檢查一下白金線和電極那整組
03/21 00:21, 28F
推
03/21 21:13, , 29F
會不會是power故障？我們實驗室也有一個power跑20分
03/21 21:13, 29F
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03/21 21:13, , 30F
鐘左右就會自動跳掉，後來借隔壁的就好了
03/21 21:13, 30F
推
03/21 21:17, , 31F
你有說設定program,有試試看拉長時間或增高電壓嗎？
03/21 21:17, 31F
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03/21 21:17, , 32F
我很少看到商用buffer會出這麼大問題呢，畢竟他們一
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03/21 21:17, , 33F
次都是好幾加侖在配...這樣問題應該不只你們有
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03/21 21:19, , 34F
題外話running bfr 不reuse...真羨慕啊！
03/21 21:19, 34F
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03/23 00:11, , 35F
aps temed放太久?
03/23 00:11, 35F
推
03/23 04:49, , 36F
幾乎確定是buffer 有問題 跑到一半 緩衝能力被耗盡
03/23 04:49, 36F
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03/23 04:49, , 37F
pH 開始劇烈改變 就跑不動了
03/23 04:49, 37F
感謝板大們的回應 最後確定是APS的問題!! ※ 編輯: huuban (140.112.82.238), 03/23/2016 15:09:58
→
03/24 10:30, , 38F
跑不到底，不會是APS的問題。你們最好要再確認一下。
03/24 10:30, 38F
OK! 其實全部的東西都換了...就是換到APS的時候問題才解決了... 另外補充一點 一開始還有一個狀況是皺褶以下的部分染不到顏色 然後處理的方式有試過的.. 換供電器 換TEMED和SDS (那時候說APS沒那麼快到貨) 換電泳槽 換Buffer (自己配) 換Tris (當時測之前那瓶pH值是8.4，比目標的8.8低了0.4) 到這個時候我聽他們說蛋白質過得去了，可是摺痕還在 最後換了APS，就甚麼都正常了 或許問題不是只有一個 / \ 總之還是很感謝大家 ※ 編輯: huuban (36.230.219.178), 03/24/2016 11:05:25
→
03/24 12:10, , 39F
結局相當有趣~竟然是APS~還真沒想到 上了一課!
03/24 12:10, 39F
推
03/24 17:07, , 40F
凝一半就沒力的意思嗎?? XD
03/24 17:07, 40F
推
03/24 17:35, , 41F
原來兇手是APS，你就到監獄裡好好反省吧
03/24 17:35, 41F
推
03/24 20:38, , 42F
答案真是出人意表XD
03/24 20:38, 42F
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03/25 04:18, , 43F
所以跑不到底畢竟不是APS的問題。關於摺痕，可以有多一點描
03/25 04:18, 43F
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03/25 04:20, , 44F
述嗎？因為這個case有點意思，想記錄下來備用。再請問，你們
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03/25 04:23, , 45F
APS是粉沫嗎？平常有放防潮箱嗎？使用時是配置多大量，剩下
03/25 04:23, 45F
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03/25 04:23, , 46F
的又是如何處理？不好意思了。謝謝回應～
03/25 04:23, 46F
推
03/25 20:37, , 47F
APS要現泡比較好啦
03/25 20:37, 47F
我很想回答各位的問題也很願意討論 可是很無奈的是，我平常就沒在做這部分，我只是幫實驗室其他人來請教各位而已 細節我真的不清楚 目前常用的那幾位最近趕畢業所以都很忙，我只能就我知道的盡量回答 APS我們一直都知道它應該要放防潮箱 無奈實驗室防潮箱早就壞了又一直無法處理(不要問我為什麼，這討論不完的) 平常我不確定一次是配多少(我沒配過) 只知道配好的都放在-20 最近出問題之後 有發現原本的powder已經變色 一看到變色當然就不敢用了 處理問題的過程中有跟別的實驗室借APS 但問題沒有解決(當然也可能他們的也壞了，因為他們更少用..) 那時候開始往Tris的pH值找答案 後來調了pH值也發現摺痕還在 (到底什麼時候開始蛋白質能跑過摺痕以及跑過去之後染不染得到這我不清楚 實驗室有些人發現實驗出了問題也從來不講 所以這個問題當初怎麼開始的我們也完全沒有頭緒 只是突然有一個人講了，一問才知道問題很久了，真是很糟糕的情形) 至於pH值的問題 因為有一些藥品是需要很準的pH值才會溶解 所以我一直相信我們的pH計沒有太大的誤差 這次除錯過程中當然也有校正才重新測舊的Tris、配新的Tris 現在看起來都正常了 也可以證明這個部分不是問題的關鍵 會不會真的跑一半pH值改變？ 事情發生的時候我不清楚 但至少現在不會 小抱怨: APS需不需要現泡我不知道 但我聽說這次事件我們終於突然有辦法買防潮箱了 太好了真是 (啊之前各種潮解不知道在心酸什麼...?) 無論如何還是很謝謝各位 我很少接觸這個，也學到不少 :P 有問到什麼我會再po上來 ※ 編輯: huuban (118.160.135.65), 03/25/2016 23:07:01
推
03/26 05:07, , 48F
是不是很多人用iphone... (誤)
03/26 05:07, 48F
iphone..??
→
03/26 11:02, , 49F
APS可以泡完分裝小管在-20℃冰箱（我分1ml一管），一管一個
03/26 11:02, 49F
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03/26 11:02, , 50F
月內用完，基本上是沒有大問題的（前提是你冰箱沒壞，也不是
03/26 11:02, 50F
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03/26 11:02, , 51F
那種會除霜的家用冰箱…）
03/26 11:02, 51F
我們的確是分小管~ 因為用很兇所以到底多久會用完這我就不清楚了...(炸 再記, 後來問了才知道 原來折痕還在 只是蛋白質過得去，折痕以外也都正常可以染膠 ※ 編輯: huuban (36.225.22.185), 03/28/2016 00:58:01
推
03/29 13:03, , 52F
蛋白質跑的最前緣會有一層折射率不同的摺痕
03/29 13:03, 52F
→
03/29 13:04, , 53F
這個平時跑膠都可以觀察到 我的印象啦
03/29 13:04, 53F
→
03/29 13:04, , 54F
他會隨著蛋白質最前緣一直往前移動
03/29 13:04, 54F
我們這次出現的這種不會動 跑之前看不到 放隔天就消失 而且蛋白質會穿過它繼續跑 所以應該是不同的狀況 ※ 編輯: huuban (36.225.247.178), 03/29/2016 15:06:29
推
04/17 11:50, , 55F
廣告
04/17 11:50, 55F
推
04/17 11:58, , 56F
我們實驗室前陣子大家跑膠都出現類似問題，就是 marker
04/17 11:58, 56F
→
04/17 11:58, , 57F
的間隔亂掉，然後蛋白的 MW 跑掉，70kD 會變成 50kD，然
04/17 11:58, 57F
→
04/17 11:58, , 58F
後我們除了 running buffer 和 transfer buffer 是共用的
04/17 11:58, 58F
→
04/17 11:58, , 59F
，其他都是個人各自配，所以剛開始以為是共用 buffer 的
04/17 11:58, 59F
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04/17 11:58, , 60F
問題，但是換了以後還是沒改善，於是有人把所有配膠的 buf
04/17 11:58, 60F
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04/17 11:58, , 61F
fer 都換了才解決，結果我是只換了 APS 就解決了。
04/17 11:58, 61F
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