[求救] 小鼠肺部冷凍包埋及切片

看板Biotech (生命科學)作者 (red)時間9年前 (2016/07/11 00:33), 編輯推噓6(6012)
留言18則, 8人參與, 最新討論串1/1
各位研究先進大家好,小妹最近開始做小鼠肺部的冷凍包埋切片,遇到了一些問題,希望 各位不 吝給我指教和意見:) 我的步驟為:將肺部剪下後浸入OCT中(沒有灌流),靜置約2小時,再放入-80冰箱保存 ,直到 要切片時將他們放入液態氮中拿到切片機所在的地方,預計切的厚度為5 um,但每次切到 組織就 會破,無法切出完整的切片,就算調到10 um也是一樣。 我有幾個疑問: 1. 是不是需要先灌OCT到肺部?需要稀釋嗎?要灌多久? 2. 冷凍包埋之後如果不以液態氮攜帶就會溶掉,溶掉的話對組織會有影響嗎? 3. 破片的原因是因為OCT沒有進到肺泡裡嗎? 4. 肺部冷凍切片有可能切到3 um嗎? 跪求大家回答我很蠢的問題~~真的切不出來都要瘋了~~~ 爬文了一下看到很多切腦組織的,但是組織不同應該也不能follow... 謝謝大家! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 218.173.21.244 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1468168408.A.15B.html

07/11 01:34, , 1F
切片溫度太低吧! 調高一點.
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07/11 09:21, , 2F
1.有聽過先全身灌流PFA固定或取組織出來後以溶液(糖溶液
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07/11 09:21, , 3F
之類)浸泡處理置換水份 沒聽過灌OCT.....建議找paper看 2.
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蛋白質在不同溫度來回會有變化吧....一定要避免呀~
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我會先用30%蔗糖置換1天在泡OCT
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如上面各位建議,先泡30%sucrose脫水一天就會變得很好切!
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要泡到它沉下去
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請問Yuchta大 切片機的溫度應該幾度比較適當呢?我是調-25
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07/11 11:59, , 9F
謝謝樓上幾位的回覆!我會試試看用30%蔗糖脫水後再泡OCT!
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07/11 20:38, , 10F
你可以在可以試的狀況下試 -25~ -15 (都切幾片試試看)
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每個組織的適合溫度都不太一樣 差幾度切起來真的有差!
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-25對於肺臟來說好像太低了一點 我都調22左右~
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感謝經驗分享!我會調整溫度試試看!:)
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不脫水直接凍切@@?
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07/12 23:13, , 15F
嗯……對…完全新手 T^T
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你要凍OCT要快啦,不能放在-80,冰晶一定是慢慢形成
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,你的組織當然破碎呀
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3 micron可能要用塑膠切片了
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文章代碼(AID): #1NWdZO5R (Biotech)
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