[求救] 小鼠肺部冷凍包埋及切片
各位研究先進大家好,小妹最近開始做小鼠肺部的冷凍包埋切片,遇到了一些問題,希望
各位不
吝給我指教和意見:)
我的步驟為:將肺部剪下後浸入OCT中(沒有灌流),靜置約2小時,再放入-80冰箱保存
,直到
要切片時將他們放入液態氮中拿到切片機所在的地方,預計切的厚度為5 um,但每次切到
組織就
會破,無法切出完整的切片,就算調到10 um也是一樣。
我有幾個疑問:
1. 是不是需要先灌OCT到肺部?需要稀釋嗎?要灌多久?
2. 冷凍包埋之後如果不以液態氮攜帶就會溶掉,溶掉的話對組織會有影響嗎?
3. 破片的原因是因為OCT沒有進到肺泡裡嗎?
4. 肺部冷凍切片有可能切到3 um嗎?
跪求大家回答我很蠢的問題~~真的切不出來都要瘋了~~~
爬文了一下看到很多切腦組織的,但是組織不同應該也不能follow...
謝謝大家!
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