PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] mtt細胞存活率

看板Biotech (生命科學)作者 (牛媽媽)時間8年前 (2017/01/12 19:39), 8年前編輯推噓6(6推 0噓 28→)
留言34則, 10人參與, 最新討論串1/1
各位大家好，我的實驗是利用牛耳朵細胞來做實驗，是利用荷蘭牛跟黃牛的耳朵，做熱處理再利用mtt來測存活率。 實驗的步驟是，細胞解凍後24小時就繼代，待細胞養到八九成滿後，接種到96well分別做兩種濃度 一個是十的五次方 一個是十的六次方 每孔加100ul，分三組 分別為控制組、熱處理12h、熱處理24h。 熱處理培養箱溫度為42.5 7%co2 同一時間接種完後先放38.5度 5%co2培養 培養24小時後先將熱處理24h移入熱處理培養箱 36小時候後將12h熱處理組移入熱處理培養箱 而控制組則是一直都在38.5度培養箱中。 熱處理完後倒掉培養液 三組於同一時間加mtt藥劑（1mg/L）每孔加50ul，放回38.5培養箱3小時，再取出倒掉mtt 藥劑在加入50ulDMSO搖晃10分鐘，在去測od值 可是測出來的存活率都是熱處理比控制組存活率來得高，問了老師老師只說是我們自己的問題，因為方法是學姐教我們的，我們也做了五六次了，數據出來都是這樣，也請學姐從頭到尾看一次我們實驗，也沒找出什麼問題，可是數據就一直都不能用…………懇請各位大大們幫幫我吧… 一直失敗感覺超級失落。。。。 ----- Sent from JPTT on my Samsung SM-P355Y. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.177.177.42 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1484221185.A.3CE.html
→
01/12 19:55, , 1F
那你用顯微鏡看實驗組細胞也比較多嗎?
01/12 19:55, 1F
→
01/12 20:15, , 2F
實驗組的溫度會不會影響粒線體的活性? 所以影響MTT結果
01/12 20:15, 2F
今天看過了 處理組跟控制組細胞看起來一樣多 哭
→
01/12 21:37, , 3F
用手(計數器)算算看，若結果相同就是你們老師該去處理的事了
01/12 21:37, 3F
→
01/12 21:37, , 4F
不是所有實驗都會如預想的結果一樣
01/12 21:37, 4F
→
01/12 21:37, , 5F
若老師執意覺得是學生問題，那就塊陶阿
01/12 21:37, 5F
你說接種在96well裡頭做完處理後再把細胞打起來算細胞數？
→
01/12 21:38, , 6F
除非有之前人有做過預期的結果
01/12 21:38, 6F
之前學長用tunel跑flow有跑出有差異 可是現在我們用mtt測就一直做不出來....
推
01/13 08:54, , 7F
同 B大，後面學生推翻以前實驗室的結果不算不常見，尤
01/13 08:54, 7F
→
01/13 08:54, , 8F
其當先前條件不 detail時
01/13 08:54, 8F
推
01/13 09:53, , 9F
想問一下，有做 blank組嗎 (完全沒細胞的)
01/13 09:53, 9F
沒有耶 都是sample直接測
推
01/13 10:55, , 10F
MTT因為跟粒線體有關 所以會有假陽性的可能 要排除
01/13 10:55, 10F
→
01/13 10:55, , 11F
必要時可能還是要計算數量來比對 或者再做LDH來互相比
01/13 10:55, 11F
再試這最後一次 希望老師會死心 大大還有推什麼比較簡單可以測存活率的方式嗎？
→
01/13 10:56, , 12F
照 才會精準
01/13 10:56, 12F
→
01/13 13:50, , 13F
測細胞存活率還有其他的實驗方法
01/13 13:50, 13F
有努力想讓老師換別種方式
→
01/13 16:54, , 14F
感謝各位 目前老師還是想嘗試 他有更改一些試驗方式
01/13 16:54, 14F
→
01/13 16:54, , 15F
增加三個控制組 分別為接種完24 36 48小時測 就
01/13 16:54, 15F
→
01/13 16:54, , 16F
讓他弄最後一次吧 有跟別的老師討論過 外系老師想
01/13 16:54, 16F
→
01/13 16:54, , 17F
法跟大家一樣 認為換個方法去測比比較好 但是我老師
01/13 16:54, 17F
→
01/13 16:54, , 18F
執意要我再測一次 只好陪他試這最後一次吧
01/13 16:54, 18F
※ 編輯: cowmama311 (118.233.44.232), 01/13/2017 16:55:45 ※ 編輯: cowmama311 (118.233.44.232), 01/13/2017 16:56:56 ※ 編輯: cowmama311 (118.233.44.232), 01/13/2017 16:58:59 ※ 編輯: cowmama311 (118.233.44.232), 01/13/2017 16:59:24 ※ 編輯: cowmama311 (118.233.44.232), 01/13/2017 16:59:54 ※ 編輯: cowmama311 (118.233.44.232), 01/13/2017 17:01:05
→
01/13 18:16, , 19F
細胞剛解凍,MT活性還沒回來,測MTT可能沒變化
01/13 18:16, 19F
→
01/13 18:16, , 20F
per 96well可以放十萬,百萬顆? 牛耳朵細胞非常小顆嗎
01/13 18:16, 20F
→
01/13 18:17, , 21F
細胞多,final MTT濃度卻比常用的少幾百倍,以前都這樣做?
01/13 18:17, 21F
→
01/13 18:17, , 22F
DMSO 50ul在96well在shaker應該搖不均勻,是用reader振的?
01/13 18:17, 22F
方法是學姐教的 這也是我一第一次做 因為學姐用豬耳朵細胞做有最出來 所以老師要我們也試試 關於要種的細胞數量 在下一次實驗我會試試種10000顆的看看 震盪的話使用這個http://i.imgur.com/7L01yNI.jpg
→
01/13 18:17, , 23F
加MTT前是不是該讓各組細胞都回到同溫,反應效率才一致?
01/13 18:17, 23F
→
01/13 18:51, , 24F
另外 感覺你的細胞種得有點多+1 96well一般癌細胞我最多種
01/13 18:51, 24F
→
01/13 18:53, , 25F
1萬顆/well 做24hr 有時候細胞太多 生存條件不佳也有可能造
01/13 18:53, 25F
→
01/13 18:53, , 26F
成細胞死掉
01/13 18:53, 26F
→
01/13 18:57, , 27F
(對實驗設計小小建議) 2組的溫度差其實不大 培養箱溫度並不
01/13 18:57, 27F
→
01/13 18:57, , 28F
是這麼準喔
01/13 18:57, 28F
推
01/13 23:23, , 29F
最多10000 +1
01/13 23:23, 29F
推
01/14 19:19, , 30F
總共要養3天。會不會像樓樓上說的，控制組細胞太多有些
01/14 19:19, 30F
→
01/14 19:19, , 31F
爆掉了。
01/14 19:19, 31F
推
01/15 17:42, , 32F
怎麼不做positive control?
01/15 17:42, 32F
？？？？
→
01/15 18:42, , 33F
96 well 1000000顆 太多了啦，20000~100000基本上多
01/15 18:42, 33F
→
01/15 18:42, , 34F
樹細胞都會太滿了
01/15 18:42, 34F
※ 編輯: cowmama311 (118.233.44.232), 01/15/2017 23:25:16 ※ 編輯: cowmama311 (118.233.44.232), 01/15/2017 23:26:37
‣ 更多 cowmama311 的文章
文章代碼(AID): #1OTsi1FE (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 cowmama311 的文章
文章代碼(AID): #1OTsi1FE (Biotech)