[求救]Bradford定量法求助
看板Biotech (生命科學)作者knowledge265 (lonelyvenice)時間8年前 (2017/03/28 00:53)推噓8(8推 0噓 15→)留言23則, 6人參與討論串1/1
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
因為實驗室以往做western blot都是用2X denature sample buffer(不定量)直接去溶蛋
白,沸水煮5-10分鐘,離心就直接開始跑
最近開始想用lysis buffer以bradford配上BSA定量方式去做比較準確,而我實驗室上面沒
人能教我只能自己摸索,請各位指教一下
BSA先稀釋成0.5mg/ml 再開始拉標準曲線
BSA(0.5mg/ml) 1 X Bradford 最終濃度(ug/ml)
500ul 0 0
495ul 5ul 5
490ul 10ul 10
480ul 20ul 20
450ul 50ul 50
475ul 75ul 75
400ul 100ul 100
然後以595nm測吸光值 拉標準曲線 得y=0.012x+0.458
再來測我的樣品蛋白是以
1 x Bradford 499 ul 配上 樣品蛋白 1 ul 再測吸光值後帶入標準曲線
舉例我其中一個樣品測得為24.08請問單位是ug/ml還是mg/ml?
而我要不要把499ul 的bradford看做稀釋再把倍率乘回去呢?
--
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※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1490633634.A.D54.html
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