[求救] 請問是否可以知道某細胞有無表現某蛋白嗎?

看板Biotech (生命科學)作者 (酷喔)時間8年前 (2017/04/03 02:22), 8年前編輯推噓3(3010)
留言13則, 6人參與, 最新討論串1/1
如題 想請問是否有辦法可以知道某個細胞是否有表現某個蛋白 會問這個問題是因為我碰到下面所述的狀況 我目前遇到的情況是transfect某個X蛋白的WT及其mutant form(都帶有Flag-tag)到293T cell 用Western Blot壓Flag抗體得知都有transfection成功 又知道X蛋白會影響CaMKII及p-CaMKII的表現量 所以想用這同樣的lysate壓CaMKII及p-CaMKII的抗體看mutant form是否會影響他們的表現量 但好像壓不出來 查別的CaMKII的抗體的data sheet好像是293T mock transfection沒有CaMKII的band (會查別的CaMKII的抗體的data sheet是因為原本的抗體的data sheet是用mouse brain lysate) 所以是否就表示293T cell不會表現CaMKII? 所以就想請問是否有辦法可以查到某個細胞是否有無表現某個蛋白 就我的情況而言就想知道293T cell是否會表現CaMKII及p-CaMKII? 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.231.4.188 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1491157335.A.05C.html ※ 編輯: MLSHBen (61.231.4.188), 04/03/2017 02:25:46 ※ 編輯: MLSHBen (61.231.4.188), 04/03/2017 02:26:38

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拿 293T 的細胞做個 RT-PCR 看看?
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04/03 03:14, , 2F
一般sheet會用mock/transfect是要呈現Ab真的可以認抗原,而
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不是未表現,明明視覺效果跟觀感不佳,但有廠牌偷懶就愛用
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還有遇到mouse的圖時要先確認Ab辨識專一性,別家的難以參考
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至於標題問題,以array或RNAseq解析數百細胞株expression
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profile的dataset我知道的至少三個,但293T似乎都沒被納入
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直接換個細胞呢? 如 HeLa或 COS7
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想請問上面講的「明明視覺效果跟觀感不佳,但有廠牌偷懶就愛用」是甚麼意思? 查ATCC得知293T是human embryonic kidney來的,如果找embryonic kidney是否會表現是否就代表293T會表現? 謝謝! ※ 編輯: MLSHBen (140.112.122.57), 04/03/2017 11:09:14

04/03 13:26, , 8F
RTPCR看transcription level有沒有還有WB跑個positive
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04/03 13:26, , 9F
ctrl吧,視情況而定293T不一定是你的實驗的良好平台
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是說你的抗體認得到human protein嗎,雖然CamKII人鼠應
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04/03 13:29, , 11F
該有conserve啦…
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感謝您的建議! ※ 編輯: MLSHBen (140.112.122.57), 04/03/2017 15:38:42

04/03 21:39, , 12F
拿別人分析MASS的原始資料來看看
04/03 21:39, 12F

04/11 17:48, , 13F
查DNA序列是否有排序過。
04/11 17:48, 13F
文章代碼(AID): #1OuK5N1S (Biotech)
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