[閒聊] 詢問大腸桿菌BL21(DE3)表達重組蛋白

看板Biotech (生命科學)作者 (赫拉克羅斯)時間8年前 (2017/04/19 17:05), 編輯推噓3(309)
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http://i.imgur.com/4PlsdE0.jpg
問題是這樣的蛋白預計分子量為38kDa.(不含6x his ) 但實際跑SDS-PAGE 目標片段跟marker比對。卻是介於40-55kDa.. 請問該如何解呢 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 117.56.151.223 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1492592749.A.BB2.html

04/19 17:42, , 1F
合理 請想像1.膠體的3D立體結構 裡面有空隙 讓蛋白質
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在裡面跑 一樣分子大小蛋白質 折疊的比較密的 跑比較快
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比較鬆散的 跑比較慢2.分子量大小一樣 電性可能不同
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04/19 17:44, , 4F
電泳跑快跑慢 很難說3.分子量標準品是某個蛋白用作比照
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所以某個片段大小 是相對位置 不是絕對位置 只能說應
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該在差不多位置附近 而不是絕對位置4.6XHIS也是有大小
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04/19 18:16, , 7F
了解!感謝你
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04/19 19:20, , 8F
帶正電比較多的蛋白會跑得比較慢 壓個western或打個MS
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04/19 19:20, , 9F
確認?
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04/28 15:50, , 10F
或者確認一下有沒有看對marker,遇過有人不管用什麼b
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uffer跑膠都看同一組,有時候就是band上面或下面的差
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04/28 15:50, , 12F
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文章代碼(AID): #1OzoXjko (Biotech)
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