[求救] 4%PFA固定細胞問題

看板Biotech (生命科學)作者 (阿希希)時間8年前 (2017/04/26 12:16), 編輯推噓1(1023)
留言24則, 6人參與, 最新討論串1/1
想請問各位做過ICC的大大們, 事情是這樣的,我們老師要求我在做ICC之前先試試用PFA固定細胞(在tube裡),然後上Flow cytometry來確認PFA固定會不會影響到抗體的binding,所以我剛才就試著用上flow的方式來固定細胞,但是在PBS wash兩次之後細胞就消失了,根本還來不及stop 請問用PFA固定細胞是不是一定要貼片的細胞呢??我不知道問題出在哪裡QQ ----- Sent from JPTT on my Sony E6853. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 42.73.119.98 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1493180183.A.40B.html

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我上flow是用酒精固定,不是PFA
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我們老師想用flow確認PFA固定會不會影響到抗體binding
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,確認之後才可以做ICC
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細胞就消失是什麼意思?肉眼在tube看不到pellet嗎? 應該只
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是離心次數多了 流失細胞使細胞數變少而看不到 且PFA固定
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似乎會使細胞變小而更看不到pellet 但硬作下去上機還是有
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機會看到細胞的... 只是要試為何不就直接用ICC試?
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我全血有用過PFA, acetone和Glutaraldehyde都固定沒問題
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肉眼看不到但是可能還是有細胞
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我也想問我們老師為什麼要我用flow上QQ
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請問全血如果用福馬林對血球會很傷嗎??
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等等去上機看看,希望開獎成功
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"formaldehyde對細胞很傷嗎"??? 所有fixation都是直
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接把細胞殺死並且保存某種特性啊 pfa主要是morphology
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你的protocol是什麼?
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我這次上flow是先用FACS回溶後離心,加同體積的pfa冰
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上固定15分鐘,再離心後用pbs洗兩次,過程全部在tube
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內,洗兩次後就看不太到細胞了所以沒有洗第三次,也沒
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有stop,就直接染色然後上機
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離久一點啊 fix後會比較強壯
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喔喔好的!那轉速需要提高嗎??我是用1800rmp
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在沒有rotor information的情況下rpm一點意義都沒有
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請報g值
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先離久一點看看 不夠再加速
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文章代碼(AID): #1P01yNGB (Biotech)
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