PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] tranfection LF2000 OPTI-MEM問題

看板Biotech (生命科學)作者 (allthebest)時間8年前 (2017/04/26 17:29), 編輯推噓0(0推 0噓 13→)
留言13則, 3人參與, 最新討論串1/1
LF2000新手 第一次用lipofectamin2000做transfect(以前用lentiviro system) 大概步驟看protocol都懂 我要轉染siRNA 也買了OPTI-MEM 我卡在siRNA+Opti-MEM以及LF2000+Opti-MEM mixture要加入細胞的地方有問題 q1:除了mixture之外 我的細胞培養液也是全部換成reduse serum Opti-MEM嗎? 還是原本細胞適用的McCoy5A培養液原液（不加fbs,ps) q2: trasfect 4-6h 要換compelet medium (就是看到這個步驟我才會想上一步驟transfect時是不是用McCoy5A原液） 所以我只有trasfect 6小時 然後其他42小時只是在等細胞複製這樣嗎？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.25.92.164 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1493198960.A.B55.html
→
04/26 17:54, , 1F
已找到高手解決:)
04/26 17:54, 1F
→
04/26 17:58, , 2F
高手說q1用原液，q2可以拉長到12-16小時再換complete
04/26 17:58, 2F
→
04/26 17:58, , 3F
medium 有高手有其他建議也很歡迎喔 謝謝
04/26 17:58, 3F
→
04/26 19:21, , 4F
其實都要再試試，不同細胞會有不同的效果
04/26 19:21, 4F
→
04/26 19:22, , 5F
有些用Opt-MEM效果會比用 growth medium 效果好
04/26 19:22, 5F
→
04/26 19:22, , 6F
(C2C12就是這樣)沒有什麼步驟一定好，像我做是
04/26 19:22, 6F
→
04/26 19:22, , 7F
18~24hr才換medium
04/26 19:22, 7F
→
04/26 19:23, , 8F
所以最佳條件還是要看不同細胞株去 try 才會知道
04/26 19:23, 8F
→
04/26 23:37, , 9F
transfect 後要換 medium 主要是因為 lipo 有毒性，如
04/26 23:37, 9F
→
04/26 23:37, , 10F
果你的細胞很耐都不會死，反而都不用換 transfect 的
04/26 23:37, 10F
→
04/26 23:37, , 11F
效率還會高的多
04/26 23:37, 11F
→
04/26 23:38, , 12F
所以就如 e 大說的，不同細胞株的狀況都不太一樣
04/26 23:38, 12F
→
04/27 00:03, , 13F
了解 原來是因為lipo有毒性啊 感謝我會參考的
04/27 00:03, 13F
‣ 更多 allthebest 的文章
文章代碼(AID): #1P06XmjL (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 allthebest 的文章
文章代碼(AID): #1P06XmjL (Biotech)