[討論] 酵母菌的蛋白表現
表現真核生物的蛋白質的時候通常選用酵母菌
而非細菌是因為同樣為真核生物可以做修飾
真核生物的基因一般都帶有Intron
所以都是由mRNA轉成cDNA來做表現
理論上mRNA用Oligo dT當作Primer做RT-PCR轉成cDNA
但是我Boss說實際上mRNA在操作時候容易斷掉，很難只用dT primer做成功
一般都用Random primer比較合理
然後要PCR做出全長2k以上的cDNA不容易
所以現在都改用直接拿序列給廠商合成DNA的方式去做了
那小弟想說，為什麼不直接拿gDNA去給酵母菌表現呢？
同為真核生物應該也有剪切Intron的功能吧？
但是Boss說都沒有人這樣做......
如果是因為物種差異造成intron splicing不同
那要做真菌的蛋白質表現成功率是否可能會比較高呢
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.217.199.95
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1505399676.A.80E.html
※ 編輯: ernielwl (180.217.199.95), 09/14/2017 22:35:39
→
09/14 22:52, , 1F
09/14 22:52, 1F
→
09/14 22:52, , 2F
09/14 22:52, 2F
如果只是針對某一段蛋白，cds 2kb而 gDNA含intron 5k左右
→
09/14 22:55, , 3F
09/14 22:55, 3F
→
09/14 22:58, , 4F
09/14 22:58, 4F
我Boss說用dT primer就只能從尾巴往前P，如果中間斷了就做不出來，Random就有機會做
出前面或中間的片段
所以拿cDNA做Template時候，primer設計夾出的片段一次大概1kb以下，太長會失敗，要
做出2K以上的cds都要分3~4段起來組
※ 編輯: ernielwl (180.217.199.95), 09/14/2017 23:17:47
推
09/15 00:02, , 5F
09/15 00:02, 5F
→
09/15 00:02, , 6F
09/15 00:02, 6F
→
09/15 00:03, , 7F
09/15 00:03, 7F
→
09/15 00:04, , 8F
09/15 00:04, 8F
我Boss有開玩笑說要我去表現gDNA，反正去抽酵母菌RNA比對gDNA就知道splicing的方式
對不對，有點苦笑不得XD
※ 編輯: ernielwl (180.217.199.95), 09/15/2017 00:25:54
→
09/15 12:57, , 9F
09/15 12:57, 9F
→
09/15 12:58, , 10F
09/15 12:58, 10F
→
09/15 13:01, , 11F
09/15 13:01, 11F
→
09/15 13:03, , 12F
09/15 13:03, 12F
→
09/15 13:03, , 13F
09/15 13:03, 13F
→
09/15 13:04, , 14F
09/15 13:04, 14F
→
09/15 13:04, , 15F
09/15 13:04, 15F
tomny大講的都對，只是目前我lab要表現的蛋白其實挺短的，cds 2k ,gDNA 4k而已 所
以有點想嘗試看看
※ 編輯: ernielwl (180.217.217.30), 09/15/2017 17:37:44
→
09/15 20:50, , 16F
09/15 20:50, 16F
→
09/15 20:50, , 17F
09/15 20:50, 17F
→
09/15 20:51, , 18F
09/15 20:51, 18F
推
09/15 23:03, , 19F
09/15 23:03, 19F
→
09/15 23:03, , 20F
09/15 23:03, 20F
→
09/16 04:13, , 21F
09/16 04:13, 21F
→
09/16 04:14, , 22F
09/16 04:14, 22F
→
09/16 04:18, , 23F
09/16 04:18, 23F
→
09/16 04:19, , 24F
09/16 04:19, 24F
→
09/16 04:20, , 25F
09/16 04:20, 25F
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
97
171