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[求救] 細胞IF固定

看板Biotech (生命科學)作者 (~方吉~)時間7年前 (2018/04/12 16:33), 編輯推噓3(3推 0噓 10→)
留言13則, 5人參與, 7年前最新討論串1/1
各位前輩好 我最近要做算細胞染色體數目的實驗 之前實驗室留下來的protocol是加秋水仙素O/N之後 泡低張溶液然後用Methanl:Acetic acid = 3:1的固定液去固定 接著滴片染DAPI 但是我老闆因為怕滴片滴的不好不容易計算染色體數目 所以買了一隻CENPB的抗體來做IF再染DAPI想說會比較好計算 於是乎我滴完片之後就直接接著原本IF固定完後的protocol做 發現完全染不出來 原本IF的protocol是用4%PFA固定 之前也有先用不是metaphase的細胞測試這隻抗體照原本的protocol做是可以染出來的 所以不知道是不是因為固定液不同的關係 還是說我在收metaphase的細胞的時候可以改用4%PFA試試看? 麻煩各位前輩解惑 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.125.32 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1523522011.A.887.html
推
04/12 16:44, 7年前 , 1F
用Methanol固定的原因是?
04/12 16:44, 1F
→
04/12 18:45, 7年前 , 2F
有protocol是用methanol固定，我個人覺得效果不是很好
04/12 18:45, 2F
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04/12 18:46, 7年前 , 3F
就是了
04/12 18:46, 3F
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04/12 19:25, 7年前 , 4F
我們實驗室留下來收metaphase cell用的固定液就是Carnoy
04/12 19:25, 4F
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04/12 19:25, 7年前 , 5F
's fixative, 我其實不太知道是不是能換。所以上來問問
04/12 19:25, 5F
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04/12 19:25, 7年前 , 6F
看有沒有對這比較熟的前輩能不能換成4%PFA固定
04/12 19:25, 6F
推
04/12 20:23, 7年前 , 7F
所以想不到不行的原因那就試試看囉XD
04/12 20:23, 7F
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04/12 20:24, 7年前 , 8F
PFA固定以後染色時要多做permeable這步
04/12 20:24, 8F
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04/12 20:25, 7年前 , 9F
平行測試看誰比較美比較好數
04/12 20:25, 9F
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04/12 20:34, 7年前 , 10F
我做 IF 都是 PFA 故洞，然後用 methanol 打洞 XD
04/12 20:34, 10F
推
04/12 23:26, 7年前 , 11F
借問一下樓上Methanol打洞的條件XD 我都用Triton...
04/12 23:26, 11F
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04/13 16:32, 7年前 , 12F
100% methanol(放冰箱)，加到細胞後放-20 度 10 分鐘
04/13 16:32, 12F
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04/14 20:34, 7年前 , 13F
Meoh打完洞後建議 PBS洗個5分鐘
04/14 20:34, 13F
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