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[求救] 細胞離心失敗& flow cytometry

看板Biotech (生命科學)作者 (黑火)時間7年前 (2018/04/16 20:58), 7年前編輯推噓6(6推 0噓 17→)
留言23則, 7人參與, 7年前最新討論串1/1
各位大大好，小弟最近剛踏入生物領域， 日前在把細胞切下來後，拿去離心機離心 其中有一管一直離不下來，會有像是絲狀物 卡在中央或在中下區域 1.用的是15mltube(裝到14ml) 2.400g 3分鐘 (失敗後又在離2次，結果一樣) 3.用的是 eppendorf 5810R，離心的時候，指標停在braking(是不是理論上應該要在accleration) 4.在離心前，細胞已經有一些絲狀沉澱 還有額外一個問題，大家在做flow cytometry 都是用幾盤細胞下去做? 做做細胞計數前，大家都怎麼把細胞打散均勻? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 24.61.246.185 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1523883495.A.815.html
推
04/17 09:56, 7年前 , 1F
首先先確認離心機有沒有轉,可以增加一點離心時間
04/17 09:56, 1F
→
04/17 09:57, 7年前 , 2F
大概5min左右, 拿出來倒掉上清, 先用手輕彈離心管
04/17 09:57, 2F
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04/17 09:58, 7年前 , 3F
至沉澱散開, 再加適量的培養基用pipet的方式打散
04/17 09:58, 3F
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04/17 09:59, 7年前 , 4F
要吸吐幾下看細胞種類, 可以從計數器的均勻程度判斷
04/17 09:59, 4F
感謝大大建議
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04/17 19:45, 7年前 , 5F
切下細胞後有加入含血清的培養基再離心嗎? 有時候加的
04/17 19:45, 5F
我沒有在加培養基
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04/17 19:45, 7年前 , 6F
量太少會這樣 ；建議是加入3倍以上 trypsin體積的培養
04/17 19:45, 6F
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04/17 19:45, 7年前 , 7F
基做中和
04/17 19:45, 7F
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04/17 19:50, 7年前 , 8F
acc只是顯示加速度多少吧，braking是指離心停止時會有
04/17 19:50, 8F
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04/17 19:50, 7年前 , 9F
摩擦力去提升降速
04/17 19:50, 9F
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04/17 19:50, 7年前 , 10F
離心機有沒有轉摸一下外殼應該就知道了
04/17 19:50, 10F
※ 編輯: darkfiredark (24.61.246.185), 04/18/2018 07:40:53
推
04/18 11:21, 7年前 , 11F
切完以後一定要加培養基中和trypsin，也有人加10倍
04/18 11:21, 11F
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04/18 11:21, 7年前 , 12F
PBS稀釋，作用過頭細胞雖不會破，但會因為表面蛋白
04/18 11:21, 12F
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04/18 11:21, 7年前 , 13F
消失不再貼附，也會死掉。
04/18 11:21, 13F
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04/18 11:21, 7年前 , 14F
為免誤會解釋一下，是10倍體積的PBS~
04/18 11:21, 14F
推
04/18 14:22, 7年前 , 15F
絲狀沈澱應該是細胞被切爛了
04/18 14:22, 15F
推
04/19 02:46, 7年前 , 16F
絲狀也有可能是細胞太滿 切下來聚集成絲狀
04/19 02:46, 16F
基本上是因為這樣，拿到顯微鏡下看，絲狀物確實有著一堆細胞 ※ 編輯: darkfiredark (24.61.246.185), 04/20/2018 08:07:55
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04/20 18:01, 7年前 , 17F
可是會變成絲狀通常就是有細胞破掉了，DNA跑出來把細胞
04/20 18:01, 17F
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04/20 18:01, 7年前 , 18F
纏在一起，不然只要pipet幾次應該還是會散掉
04/20 18:01, 18F
推
04/23 08:47, 7年前 , 19F
Flow部分,不同實驗需求的細胞數不太一樣,先看看你要
04/23 08:47, 19F
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04/23 08:47, 7年前 , 20F
做啥？
04/23 08:47, 20F
推
04/29 00:53, 7年前 , 21F
Trypsin 過頭了，做用完一定要快一點加入含FBS的medium
04/29 00:53, 21F
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04/29 00:53, 7年前 , 22F
或FBS，怕打不散就用大量PBS稀釋，重點是要快，來不及就
04/29 00:53, 22F
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04/29 00:53, 7年前 , 23F
一次不要處理超過兩盤細胞
04/29 00:53, 23F
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