[求救] 冷凍切片HE染色（大鼠腎臟）

看板Biotech (生命科學)作者litbeee (bee)時間7年前 (2018/05/09 21:26)推噓0(0推 0噓 0→)

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最近再染大鼠腎臟冷凍切片前置作業為大鼠灌流取器官>10%蔗糖溶液>20%>30%（各一天）>冷凍切片要染色當天： 40%福馬林 10min PBS wash 3min *3次流動水 5min Hematoxylin 20~30 sec 流動水 30sec 0.1%HCL 3times (約5sec) 流動水 30sec Li2CO3 30sec 流動水 5min 95% Ethanol 30sec Eosin 20 sec 50% Ethanol 30sec 75% Ethanol 30sec 95% Ethanol 30sec 100% Ethanol 30 sec Xylene 6min 但染出來的片子H的顏色在細胞質卡色如果酸洗多一些又會連核的顏色一起洗掉 H的顏色細胞質跟細胞核區分不大，每次染出來的片都很髒，會呈現有點黑色試了很多H及E和酸洗的比例，結果都是差不多，顏色對比不清楚、核不清楚一直卡在這個瓶頸很久！有天，試了一個前人留下來的流程福馬林、PBS後，100%酒精>95%>75%>50%再進行後面一樣的步驟H、酸洗、鹼呈........ 所有條件都一樣，只多加了一個酒精復水然後做出來的成果卻紅藍分明，細胞核有上色、也沒有在胞質卡藍黑色意外的成功 - 但是跟學長討論的結果是他覺得這樣的結果很奇怪 1、網路上幾乎查不到將冷凍切片復水的流程 2、因為40%福馬林就是水溶性的以及PBS的步驟已經復水了想問板上的大師們，我的流程還有什麼會造成這種結果的可能性嗎？染色新手，如果過程不夠清楚請多多包涵！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.237.25.39 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1525872412.A.87D.html ※ 編輯: litbeee (36.237.25.39), 05/09/2018 21:27:25