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[求救] adenovirus amplify

看板Biotech (生命科學)作者 (~方吉~)時間7年前 (2018/05/11 08:21), 編輯推噓3(3推 0噓 10→)
留言13則, 5人參與, 7年前最新討論串1/1
各位前輩好 小弟最近在amplify Adenovirus 步驟是將買來的病毒(有GFP) infect到293T 觀察細胞全亮且大約8-9成飄起來的時候 離心將細胞離下來, 上清液取出備用 這時候可以觀察到細胞pellet是有綠綠Der 然後加100ul PBS回溶pellet, 接著液態氮-37度水浴槽冷凍解凍五次 然後再離心收上清液，分裝凍-80 但是再解凍出來infect細胞的時候 titer都超低阿阿阿!!!! 老師說他以前這樣做可以收到 10^10 pfu/ul 目前想破頭只想到可能是不能用液態氮去冷凍解凍 想請問各位前輩還有可能是哪一步出了問題?? 感激不盡!!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.125.32 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1525998118.A.87F.html
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05/11 10:27, 7年前 , 1F
我這邊是用乾冰+MeOH 解凍三次
05/11 10:27, 1F
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05/11 10:29, 7年前 , 2F
去年最後一次做 2x10^9
05/11 10:29, 2F
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05/11 10:57, 7年前 , 3F
順便問一下您儲存的時候會加10% Glycerol還是DMSO嗎?
05/11 10:57, 3F
推
05/11 13:42, 7年前 , 4F
可以試試看用新鮮的上清作感染測試,就知道是不是
05/11 13:42, 4F
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05/11 13:43, 7年前 , 5F
保存的問題囉
05/11 13:43, 5F
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05/11 15:01, 7年前 , 6F
凍-80有先用液態氮炸嗎
05/11 15:01, 6F
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05/11 15:49, 7年前 , 7F
就用液態氮冷凍解凍完取上清液直接凍-80
05/11 15:49, 7F
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05/11 23:43, 7年前 , 8F
只有medium 沒加抗凍成分
05/11 23:43, 8F
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05/12 02:53, 7年前 , 9F
忽然想到重複冷凍解凍似乎很多protein會掛掉
05/12 02:53, 9F
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05/12 02:54, 7年前 , 10F
不能用其他方式破嗎？
05/12 02:54, 10F
推
05/12 11:40, 7年前 , 11F
之前在研究virus release的方法,可以用dounce的
05/12 11:40, 11F
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05/12 11:41, 7年前 , 12F
不過後來沒試過效果就是
05/12 11:41, 12F
推
05/28 13:30, 7年前 , 13F
每ul10的10次方，不濃縮怎麼可能
05/28 13:30, 13F
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