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[求救] 求過表現載體影響農桿菌轉殖效率之paper

看板Biotech (生命科學)作者 (葉綠體)時間7年前 (2018/05/22 19:31), 編輯推噓1(1推 0噓 16→)
留言17則, 3人參與, 6年前最新討論串1/1
各位仍辛苦為實驗與論文奮鬥的同學或前輩，大家好! 之前做番茄轉殖，以10天大子葉為培植體，分別轉殖兩個基因A、B， A是以35S啟動子過表現，B是以自身的啟動子去表現。 但我發現A不論是培殖體再生率或轉殖率皆遠低於B。 因此，我在想是不是基因過表現的關係影響農桿菌活性進而造成此種差異。 為了佐證我的想法 我在Google學術搜尋不論輸入agrobacterium、transformation efficiency、 overexpression等關鍵字仍找不到相關的paper。 所以想尋求有做植物基因轉殖的大大們是否有看到這類的文獻， 可否張貼文獻名稱供我查閱， 感激不盡!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.120.190.245 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1526988701.A.AE4.html
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05/22 23:40, 7年前 , 1F
35s沒那麼強 確認你的vector沒錯, protein有in frame,
05/22 23:40, 1F
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05/22 23:40, 7年前 , 2F
codon usage有看? protein有沒有毒性? 抽過RNA看expr
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05/22 23:40, 7年前 , 3F
ession沒有? 都確認過再來看奇怪的假設
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05/23 01:00, 7年前 , 4F
載體是二元載體pGA482G
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05/23 01:08, 7年前 , 5F
A蛋白是Hsp40,應該無毒性。因為兩基因之前都轉過菸草，
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05/23 01:08, 7年前 , 6F
在轉殖上沒有那麼大差異，轉殖株外觀與WT也無太大差別
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05/23 01:16, 7年前 , 7F
沒看番茄RNA表現，但學長菸草轉殖株RNA都有顯著增加
05/23 01:16, 7F
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05/23 02:14, 7年前 , 8F
我如果是你我如果要趕畢業不會花時間來看這個東西,
05/23 02:14, 8F
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05/23 02:14, 7年前 , 9F
畢竟我只需要一個clone, efficiency再低我也沒差. 你
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05/23 02:14, 7年前 , 10F
真的要看的話得用同樣的基因(可能還得多幾個)掛兩個
05/23 02:14, 10F
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05/23 02:14, 7年前 , 11F
不同的promoter以外可能還得做truncation/rescue實驗.
05/23 02:14, 11F
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05/23 02:15, 7年前 , 12F
老實講我覺得比較有可能是你這個cultivar的番茄莫名
05/23 02:15, 12F
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05/23 02:15, 7年前 , 13F
對hsp40敏感之類的
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05/23 22:21, 7年前 , 14F
謝謝l大，或許這也是一個原因。
05/23 22:21, 14F
推
09/26 09:08, 6年前 , 15F
通常表現載體不太effect轉殖率，比較有可能的是蛋白本
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09/26 09:08, 6年前 , 16F
身的問題，如果兩個基因在同一個載體上表現不同通常猜
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09/26 09:08, 6年前 , 17F
的都是蛋白本身的特性
09/26 09:08, 17F
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