Re: [求救] CCK8 cell proliferation assay

看板Biotech (生命科學)作者Ianthegood (厭惹故)時間6年前 (2018/12/28 00:21)推噓0(0推 0噓 6→)

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先唸一下常常看到這種發問的細節都只交待一半這等於是要板友不是幫你抓蟲而是把"所有"可能出錯的地方都點出來 : 目前使用此款kit分析細胞存活率，使用的 kit的原理是什麼? 在大部分人都用MTT的情況下你期待板友還得自己去估狗再來幫你抓蟲? 還是你只希望有用過這個kit的少數板友來回答? : 波長為460nm，參考波長650nm。這個是重點, 所以你是以650當作blank? : 遇到一個問題是： : Blank的值落在0.075上下 : Sample分為3組 : 第一組：0.13 : 第二組0.03 : 第三組：0.078 所以我說三組處理分別是什麼? : 第三組的吸收值接近背景值，想說可能沒什麼 : 活細胞，但第二組比背景低更多，想請問有哪些可能會造成吸收值比背景低很多？ : 每一組n=4，數值彼此都滿接近，使用的培養液有用含有phenol red跟不含phenol red， : 做出來第二組的樣品都呈現一樣趨勢。讀值的標準差? 這個差異會不會是機器的誤差造成的? 或是pipetting error? 每一組n=4, 但是每個n只跑一個well? (我假設你是用96-well reader, 你又沒講) 最顯而易見的原因就是你的機器拿650當blank, 然後你第二組有某個東西很吃650 你的處理會不會跟medium跟kit裡面的東西反應? 你有看過raw spectra? 460跟650看起來正常? 你的blank是水? 你有拿123組的medium讀過嗎? 你的proper negative control應該是每種medium only不加細胞, 另外還要再做水你有上過顯微鏡(搭配vital stain)或是用其他的kit驗證你這個kit的結果嗎? 同時建議, 實驗室化學背景的博後說, 每個sample上機都得做repetition 統計才有意義, 最好在well上面還要randomise排列不過有點太麻煩 : 感謝大家不客氣, 加油 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 95.148.57.53 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1545927678.A.22A.html