[求救] 小鼠腦切片破洞

看板Biotech (生命科學)作者mark24365273 (小瑋)時間5年前 (2019/12/20 23:05)推噓1(1推 0噓 2→)

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請教各位有在做小鼠動物實驗的專家們因為實驗室內只有我在做腦組織實驗目前在測試不讓腦破洞方法(上一批檢體因為破洞結果都不能用..) 在試過了文獻以及詢問他人的方法測試後仍然看到片子有破洞因此想請有經驗的各位提供是否有可以改善的建議目前做法有試過4種以下腦照片都是正常腦 (照片主要都是染H&E ）第一種（看到滿多文獻都這樣做）灌流後（先PBS再用4% PFA) 取腦 4% PFA RT O/N 15% surcose in PBS until sink 30% surcose until sink 用擦手紙把水分瀝乾 OCT包埋（底下先做一層底-20預冷）腦放入後放-80(放至少兩天）切之前1 h 丟切片機才切染色前先用10%中性福馬林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/4lCeas1.jpg

https://i.imgur.com/AOuNS3Z.jpg

第二種（灌流後不做任何處理直接包）灌流後（先PBS再用4% PFA) 取腦用擦手紙把水分瀝乾 OCT包埋（底下先做一層底-20預冷）腦放入後放-80（放至少兩天）切之前1 h 丟切片機才切染色前先用10%中性福馬林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/uQuPN3P.jpg

第三種（脫水溶液換成用水配）灌流後（先PBS再用4% PFA)取腦 4% PFA RT O/N 10% surcose in ddH2O 1 h 30% surcose until sink 用擦手紙把水分瀝乾 OCT包埋（底下先做一層底-20預冷）腦放入後放-80 切之前1 h 丟切片機才切染色前先用10%中性福馬林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/bH848r1.jpg

https://i.imgur.com/0g6sBlZ.jpg

第四種（試著把前面fix時間拉長）灌流後（先PBS再用4% PFA)取腦 10% 中性福馬林 RT 2 d 10% surcose in ddH2O 1 h 30% surcose until sink 用擦手紙把水分瀝乾 OCT包埋（底下先做一層底-20預冷）腦放入後放-80 切之前1 h 丟切片機才切染色前先用10% methanol固定 RT 10分 https://i.imgur.com/0BfglLT.jpg

目前看起來是用文獻的方法還是會遇到破洞情況，且通常破的位置主要都在腦的外圍區塊（cortex部分，腦內也會有看到）目前有考慮 1.用液態氮凍？（看到有些文獻說這樣不會破？） 2.加長脫水時間？（梯度脫水or30% surcose放兩次）想請問各位是否有建議其他包埋的方法以確保不會有破洞? 非常感謝各位給的建議 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.160.208.226 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1576854303.A.5A3.html