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[求救] 3T3-L1細胞狀態詢問

看板Biotech (生命科學)作者 (Littlebo)時間5年前 (2020/01/05 17:35), 5年前編輯推噓3(3推 0噓 8→)
留言11則, 4人參與, 4年前最新討論串1/2 (看更多)
各位大大好，敝人最近開始養3T3-L1細胞，但在加入分化劑後群聚的細胞有些部分會往旁邊散開變成一個洞(一加入分化劑後就去顯微鏡下觀察到的現象)，想問是否是因為細胞的數量over-confluent的原因?https://imgur.com/5sJ90o9
及https://imgur.com/ycQ4tb0
培養條件： 細胞數8萬/3.5cm2的well，繼代後隔天等貼盤後加入分化劑。 分化劑IBMX_O.5mM、DEXA_1uM、INS_1ug/mL medium：DMEM/FBS+1%NEAA+L-Glutamine+Pen-Strep。 另外有幾個問題想詢問各位前輩： 1.請問preadipocyte expansion medium中的BCS血清，可否改用馬血清? 2.加入分化劑的那天是為第0天，而在第2天的時候我發現我的細胞還是有持續分裂的狀態，這樣是否代表這盤的細胞已經老化，不會再進行分化了?(代數P+21) 3.想請問如附圖的細胞滿度(https://imgur.com/WVe1kvf)
是否適合加分化劑了呢? 謝謝各位前輩跟救命恩人阿~~~~ 各位前輩如果還有想提醒的小細節再麻煩您們不吝嗇地提出，謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 123.193.176.183 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1578216951.A.D76.html ※ 編輯: pets910011 (123.193.176.183 臺灣), 01/05/2020 17:43:38
推
01/18 18:20, 5年前 , 1F
3.細胞滿度太低，我是等細胞完全confluence才加入分化劑
01/18 18:20, 1F
推
01/22 13:32, 5年前 , 2F
1. FBS就足夠了
01/22 13:32, 2F
→
01/22 13:33, 5年前 , 3F
2. 要剛好全滿一層細胞，不能太稀，否則無法順利分化
01/22 13:33, 3F
→
01/22 13:33, 5年前 , 4F
代數不要太老
01/22 13:33, 4F
→
02/20 22:26, 4年前 , 5F
看起來細胞不夠滿+1
02/20 22:26, 5F
推
05/08 18:58, 4年前 , 6F
1.我是買BCRC的3T3-L1,根據BCRC的建議是要用10%BCS，
05/08 18:58, 6F
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05/08 18:58, 4年前 , 7F
但我用10%FBS還是有養起來，不要學我，最好還是使用
05/08 18:58, 7F
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05/08 18:58, 4年前 , 8F
與購買來源相同的血清養，血清更換對細胞的影響很大
05/08 18:58, 8F
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05/08 18:58, 4年前 , 9F
3.數量不夠，一篇2012年的分化protocol文獻是以60萬
05/08 18:58, 9F
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05/08 18:58, 4年前 , 10F
顆細胞養在3.5公分dish，隔天觀察貼附後才加入分化劑
05/08 18:58, 10F
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05/08 18:58, 4年前 , 11F
，我覺得8萬太少，分化時所需細胞量盡量養多一點
05/08 18:58, 11F
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