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[求救] 抽酵母菌RNA有太多small RNA

看板Biotech (生命科學)作者 (soso)時間4年前 (2020/04/01 15:56), 4年前編輯推噓4(4推 0噓 5→)
留言9則, 5人參與, 4年前最新討論串1/1
各位前輩好， 最近利用Trizol抽酵母菌的RNA，再跑native的agarose後發現28S跟18S很不明顯且有 很大一個5S RNA。 Nanodrop的數值都是正常，濃度約1ug/uL、260/280是1.9 260/230 都大於2。想請問是哪裡有降解嗎? 簡略步驟 1. 50 mL的酵母菌液離心後跟1 mL Trizol跟0.2 uL 玻璃珠混合。 2. 5次30 s vortex (中間有插在冰上至少1 min) 3. 兩次chloroform 萃取 (200 及 400 uL) 4. isopropanol 沉澱 (15 min on ice) 及兩次70% ethanol 清洗 5. 用100 uL DEPC水回溶 麻煩各位解惑了。 圖:https://imgur.com/S57oLZp
-- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.60.6 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1585727799.A.267.html ※ 編輯: adamada (140.112.60.6 臺灣), 04/01/2020 16:05:50
推
04/01 16:54, 4年前 , 1F
看起來還ok啊 做下去啊
04/01 16:54, 1F
→
04/03 09:47, 4年前 , 2F
步驟1的yeast培養狀況是怎樣？步驟2，我們不會直接拿酵母菌
04/03 09:47, 2F
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04/03 09:47, 4年前 , 3F
液去抽
04/03 09:47, 3F
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04/03 10:14, 4年前 , 4F
可能沒有寫好，是拿離心後的pellet 再加1mL trizol
04/03 10:14, 4F
推
04/03 20:51, 4年前 , 5F
後續要做甚麼分析? 沒有要定量的話 就繼續往下做囉
04/03 20:51, 5F
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04/03 22:07, 4年前 , 6F
後續要做qPCR...其實是想問那個環節可能有錯
04/03 22:07, 6F
推
04/05 22:40, 4年前 , 7F
70%酒精 有用DEPC-水配置嗎? 可能水有RNase
04/05 22:40, 7F
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04/05 22:42, 4年前 , 8F
70%酒精儲存在-20度C 強化RNA沉澱 不要被洗去太多
04/05 22:42, 8F
推
05/18 20:50, 4年前 , 9F
小片段好像很多，都被切碎了？
05/18 20:50, 9F
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