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[求救] JC-1 步驟

看板Biotech (生命科學)作者時間4年前 (2020/04/02 00:56), 4年前編輯推噓4(4推 0噓 6→)
留言10則, 5人參與, 4年前最新討論串1/1
大家好，我已經卡在JC-1很久了 也找非常多protocol 但作法太多種 還請各位幫忙 6well，螢光顯微鏡（非flow) 是癌細胞 處理藥物24小時，去除含藥medium，以PBS wash 2次，然後每well加入1c.c 與培養時一樣的含FBS血清 medium ，每個well 加入10ug /1ml，培養30分鐘，冷PBS清洗 兩次，甲醇固定15分鐘，DAPI染核15分鐘，螢光顯微鏡拍照 結果，什麼都沒有 只有DAPI發光 還有幾個問題！ 1. 染JC-1時，Medium有沒有含FBS重要嗎？ 要用PBS還是medium？ 2. JC-1 加到well 好多漂浮物，搖不開 3.每次避光的細節都有注意，但最後擠個well都會越來越暗 謝謝大家 ※ 編輯: dawnga (49.216.40.152 臺灣), 04/02/2020 00:58:59
推
04/02 09:49, 4年前 , 1F
jc-1好像只能看living cell? 看abcam的介紹
04/02 09:49, 1F
推
04/02 10:15, 4年前 , 2F
JC1只能活染 而且JC1很難溶 建議先跟medium混合均勻再加
04/02 10:15, 2F
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04/02 10:15, 4年前 , 3F
之前也有做過相同實驗 但是DAPI活染效果不好
04/02 10:15, 3F
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04/04 02:05, 4年前 , 4F
你要看什麼東西? JC1不是拿來染粒線體膜電位的?
04/04 02:05, 4F
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04/04 02:06, 4年前 , 5F
還是你只是要染ER？ 很難溶+1
04/04 02:06, 5F
推
04/05 00:10, 4年前 , 6F
有沒有含FBS其實不太重要，如果要用螢光顯微鏡看建議加到w
04/05 00:10, 6F
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04/05 00:10, 4年前 , 7F
ell以前可以用.22過濾，這樣顆粒會比較少。
04/05 00:10, 7F
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04/05 00:11, 4年前 , 8F
會越來越暗的話，有考慮mounting medium加antifade封起來
04/05 00:11, 8F
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04/05 00:11, 4年前 , 9F
嗎？
04/05 00:11, 9F
推
04/05 09:06, 4年前 , 10F
溶解度不好的話,可以考慮用JC-10
04/05 09:06, 10F
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