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[求救] IHC使用PAP法呈色

看板Biotech (生命科學)作者 (玩具)時間4年前 (2020/05/12 22:04), 4年前編輯推噓3(3推 0噓 10→)
留言13則, 3人參與, 4年前最新討論串1/1
各位前輩好 最近因實驗需要用三層抗體來做IHC染色 我之前只用過一抗接HRP二抗，然後DAB呈色 所以想來問一下各位前輩 假設我一抗用rabbit anti actin，二抗用goat anti rabbit(FITC)，三抗 就用 goat anti FITC (HRP) 以上這三個抗體的步驟是否就是稀釋的一抗，wash，稀釋的二抗，wash，稀釋的三抗，wash， DAB呈色 實驗步驟這樣做可以嗎 第一次做三層抗體，有什麼會跟兩層的不一樣嗎？ 會有什麼要另外加的鍵結嗎 這種三層抗體是會增加靈敏度嗎 感覺有點多此一舉 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 110.28.195.18 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1589292277.A.E27.html ※ 編輯: jkq (61.216.30.109 臺灣), 05/18/2020 15:08:43
推
05/18 18:48, 4年前 , 1F
你要先確定每一層抗體都只會接上一層東西而且都接的很
05/18 18:48, 1F
→
05/18 18:48, 4年前 , 2F
緊
05/18 18:48, 2F
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05/18 18:50, 4年前 , 3F
如果抗體專一性不夠會造成false positive訊號跟backgro
05/18 18:50, 3F
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05/18 18:50, 4年前 , 4F
und數值提高 降低sensitivity
05/18 18:50, 4F
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05/18 18:52, 4年前 , 5F
如果接的不夠緊容易脫落 就代表每一層接上去的比例不會
05/18 18:52, 5F
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05/18 18:52, 4年前 , 6F
是100趴
05/18 18:52, 6F
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05/18 18:52, 4年前 , 7F
接上去的比例越低就直接導致HRP數量變少 訊號變弱 sens
05/18 18:52, 7F
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05/18 18:52, 4年前 , 8F
itivity變低
05/18 18:52, 8F
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05/18 18:53, 4年前 , 9F
而且FITC看起來會影響呈色的訊號
05/18 18:53, 9F
推
05/25 18:52, 4年前 , 10F
二抗改用 anti-Rb (Biotin labeled), 三抗改用 HRP-co
05/25 18:52, 10F
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05/25 18:52, 4年前 , 11F
njugated Strepavidin呢 ? 但同一樓，你必須做每一組
05/25 18:52, 11F
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05/25 18:52, 4年前 , 12F
抗體單染的背景值 (尤其 FITC 本身又會發光)
05/25 18:52, 12F
推
05/30 08:53, 4年前 , 13F
染螢光用DAB幹嘛？
05/30 08:53, 13F
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