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[討論] Protein 在MALDI-TOF出現dimer

看板Biotech (生命科學)作者 (I am who I am)時間4年前 (2021/01/14 22:23), 4年前編輯推噓3(3推 0噓 6→)
留言9則, 4人參與, 4年前最新討論串1/1
最近使用MALDI-TOF打某個protein 出現了dimer 的現象 想問這種狀況是因為為什麼呢 會因為不同的細胞培養後純化的關係 （比如使用HEK293cell 與CHO cell) 還是本身蛋白質純化後就會有這樣的狀況 或是跟protein後面接的tag有關係呢？ 我是直接買廠商純化後的蛋白上機， 並不是自己養細胞完純化。 蛋白質是接Fc Dimer 情況是未做過reduction & alkylation， 單純加上matrix 直接上機。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 220.133.82.62 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1610634208.A.679.html
推
01/15 02:32, 4年前 , 1F
因為protein會dimerise?
01/15 02:32, 1F
→
01/15 05:17, 4年前 , 2F
印象中 Fc 好像本身就容易 dimerize
01/15 05:17, 2F
有相關paper可以驗證嗎？謝謝 ※ 編輯: janewu945 (49.216.30.174 臺灣), 01/15/2021 09:52:51
推
01/15 18:44, 4年前 , 3F
Fc 有包含 hinge 嗎？
01/15 18:44, 3F
→
01/18 12:48, 4年前 , 4F
有沒有paper我不知道，這算是經驗吧？之前表現 Fc 和
01/18 12:48, 4F
→
01/18 12:48, 4年前 , 5F
Fc fusion protein做western blotting，Fc的lane如果量
01/18 12:48, 5F
→
01/18 12:50, 4年前 , 6F
下多就會在兩倍分子量的位置出線訊號，連SDS-PAGE這種
01/18 12:50, 6F
→
01/18 12:50, 4年前 , 7F
環境它都能dimer了，一般沒denature它應該更容易dimer
01/18 12:50, 7F
推
01/23 09:51, 4年前 , 8F
買來的Fc通常都有disulfide bond，所以會形成dimer，即使
01/23 09:51, 8F
→
01/23 09:51, 4年前 , 9F
加reducing reagent也有可能少量鍵結回去形成dimer
01/23 09:51, 9F
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