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[求救] 點突變primer insert

看板Biotech (生命科學)作者 (Shofu)時間3年前 (2021/03/27 16:34), 編輯推噓1(1推 0噓 15→)
留言16則, 4人參與, 3年前最新討論串1/2 (看更多)
如題 最近在做4株backbone相同 不同位置的點突變 但transform後colony的定序結果 在應該突變的位置都會有primer的插入且有長有短 一個點突變做了2 3次 每次都送3 4顆都有相同結果 不知道有沒有人遇過並如何解決 感謝 P.S ploymerase用的是KOD Competent cell 用的是DH5a ----- Sent from JPTT on my iPhone -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 49.216.39.161 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1616834099.A.231.html
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03/27 16:38, 3年前 , 1F
補充一下
03/27 16:38, 1F
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03/27 16:38, 3年前 , 2F
Primer大概33～35bp
03/27 16:38, 2F
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03/27 16:38, 3年前 , 3F
GC content大約都50%
03/27 16:38, 3F
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03/28 01:42, 3年前 , 4F
是不是最後有加ligase,造成primer insertion?
03/28 01:42, 4F
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03/28 01:43, 3年前 , 5F
如果是complementary primer,是對應到ligation-free的SDM
03/28 01:43, 5F
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03/28 17:27, 3年前 , 6F
有長有短是指 primers的量嗎？
03/28 17:27, 6F
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03/28 19:13, 3年前 , 7F
b大 確實有加ligase 下次試試看ligase free的
03/28 19:13, 7F
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03/28 19:13, 3年前 , 8F
覺得奇怪的點是因為
03/28 19:13, 8F
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03/28 19:13, 3年前 , 9F
實驗室protocol都是這樣做的
03/28 19:13, 9F
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03/28 19:13, 3年前 , 10F
我先前也做過類似的實驗也都有成功
03/28 19:13, 10F
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03/28 19:13, 3年前 , 11F
有長有短是指primer insert的重複次數
03/28 19:13, 11F
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03/28 22:29, 3年前 , 12F
跟早期比現在SDM有各種改變了,要不要加ligase
03/28 22:29, 12F
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03/28 22:30, 3年前 , 13F
要看你們的primer是對應哪種protocol的設計
03/28 22:30, 13F
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03/28 22:46, 3年前 , 14F
那 primer orientation都一樣嗎？還是有特殊規律？
03/28 22:46, 14F
推
03/29 08:58, 3年前 , 15F
是BlacktoBack還是QuikChange方式？
03/29 08:58, 15F
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03/29 08:58, 3年前 , 16F
打錯，是BacktoBack
03/29 08:58, 16F
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