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為何我的6xHis-protein在nickel column拉梯度之初,就被洗出來!

看板Biology (生物學)作者時間19年前 (2005/11/02 12:01), 編輯推噓0(0推 0噓 0→)
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為何我的6xHis-protein在nickel column拉梯度之初,就被洗出來? 我利用大腸桿菌來表現6xHis-protein, 經過IPTG誘導後, 破菌! 將上清液灌入nickel column, 在wash時, 沒事! 但是在0~500 mM imidazole拉梯度（二十倍體積）之初, 我的6xHis-protein 在一開始（一倍體積）體積, 就被洗出來! 所以我的nickel column拉梯度圖, 就在最前面只出現了一根很大根的peak! 然後就持平到最後, 經過western blotting分析後才發現, 我的6xHis-protein在前面這根很大根的peak裡面, 但是這根很大根的peak裡面還伴隨著數百種蛋白質, 請問怎麼會這樣呀? -- * Origin: 中山大學-美麗之島BBS * From: 140.109.55.225
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