Re: [問題] 急問凍細胞的問題
看板Biology (生物學)作者prrtty (somewhere i want to...)時間20年前 (2006/02/28 14:30)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串4/5 (看更多)
謝謝大家熱情的解答.我做的是人的細胞 因為第一次做
所以查很多網站他們寫的都不一
不過一般primary cell到底有沒人在凍的,還是根本只能搶時間內做完?
※ 引述《kyv.bbs@bbs.nsysu.edu.tw ()》之銘言：
: 你可以去Nalgene買一種冷凍盒子(商品名 NALGENE Cryo 1度C Freezing Container)
: 此盒子分兩層
: 外層要加isopropyl alcohol(異丙醇)
: 冷凍小管放入此盒子內層再將此盒子放入-80度C 的冷凍櫃至少四小時
: 再將冷凍小管放入液態氮中
: 我的論文就是做冷凍新鮮分離的細胞的最佳條件
: 冷凍小管絕不能用無血清
: 血清可用50%或 70%(其實70%最好)
: 重點是解凍的程序很重要 關係存活率 其重要性不亞於冷凍的medium的比例
: 我的解凍程序是
: Avarbock et al. 1996(Nature Medicine 2,pp 693-696,1996)
: 冷凍小管自液態氮中取出
: 放入38度C(因我的是雞的primary culture)解凍 約2分鐘內解凍完全
: 移入15 ml離心管中
: 一滴一滴(dropwise)將含10%血清之培養基(不同人用的medium培養基皆不同)加入
: 邊加邊搖動離心管 加入約三倍冷凍液量的體積(記得要加一滴就搖幾下)
: 即假如你的冷凍液是1CC 你就加3CC緩衝 但不能一下子加入3ｃｃ 要
: 加一滴就搖動離心管 慢慢加完
: 800g離心5min 倒掉上清液
: 以2CC含10%血清的培養基再次清洗細胞
: 800g離心5min
: 以trypan blue exclusion計算存活
: 將細胞養入flask
: > 請問凍primary cell
: > 到底要用全血清還是無血清阿 和DMSO比例又是多少?????
: > 可不可以大家給我ㄧ個建議...謝謝各位
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