Re: [問題] 急問凍細胞的問題
你可以去Nalgene買一種冷凍盒子(商品名 NALGENE Cryo 1度C Freezing Container)
此盒子分兩層
外層要加isopropyl alcohol(異丙醇)
冷凍小管放入此盒子內層再將此盒子放入-80度C 的冷凍櫃至少四小時
再將冷凍小管放入液態氮中
我的論文就是做冷凍新鮮分離的細胞的最佳條件
冷凍小管絕不能用無血清
血清可用50%或 70%(其實70%最好)
重點是解凍的程序很重要 關係存活率 其重要性不亞於冷凍的medium的比例
我的解凍程序是
Avarbock et al. 1996(Nature Medicine 2,pp 693-696,1996)
冷凍小管自液態氮中取出
放入38度C(因我的是雞的primary culture)解凍 約2分鐘內解凍完全
移入15 ml離心管中
一滴一滴(dropwise)將含10%血清之培養基(不同人用的medium培養基皆不同)加入
邊加邊搖動離心管 加入約三倍冷凍液量的體積(記得要加一滴就搖幾下)
即假如你的冷凍液是1CC 你就加3CC緩衝 但不能一下子加入3ｃｃ 要
加一滴就搖動離心管 慢慢加完
800g離心5min 倒掉上清液
以2CC含10%血清的培養基再次清洗細胞
800g離心5min
以trypan blue exclusion計算存活
將細胞養入flask
> ==> prrtty.bbs@ptt.cc (somewhere i want to...) 的文章中提到:
> 請問凍primary cell
> 到底要用全血清還是無血清阿 和DMSO比例又是多少?????
> 可不可以大家給我ㄧ個建議...謝謝各位
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