Re: 從cell上抽出的RNA
> ==> lakerjackt.bbs@ptt.cc (NN ) 的文章中提到:
> 最近從cell上把RNA下來...也轉了cDNA
> 然後有用一段primer當internal control去夾看看有沒有轉成功
> 發現是有的!!
> 但卻可以發現跑完DNA膠後,照出的圖中,每一個well最上面
> 位置大約在load well的孔下面一點點皆有一條細細亮亮的band
> 我學長說是chromosome,那這對cDNA後續要做的實驗會有影響嗎?
差太多了！
經過萃取，只留RNA，去掉DNA，然後再去反轉錄成cDNA，
接著又去做PCR，怎還會有Chromosome？就是impurity罷了，哪會有
chromosome？
> 因為我的問題來了...就是後來我把cDNA去夾兩段片段..都沒東西
> 然後我又用gradient方式重找annealing溫度還是全沒有東西..
> 這時我想會部會我的cDNA..被分解了!!!..但這可能性因不高..
> 後來想會不會是PCR儀器有問題..我家是用PDA的PCR儀器..
> 聽說這種跑起來很差..請問有跑過的人,,,對這種儀器有哪些該注意的??
> 或到底好不好用??
> 到底需不需要找廠商來校正...
> 謝謝
你有用internal primer和＿＿＿＿primer去夾擠，有產物，產物也符合
你的要求長度嗎？如果是的話，那麼PCR mechine就沒問題。如果不確定溫度的話，
直接由最低溫試起，不用Gradient了。
另外，PCR machine有沒問題？拿個實驗室最熟的DNA與Primers去試就好了，
如果這樣都做不出來～再去找廠商吧。
--
* Origin: 中山大學-美麗之島BBS * From: 61.223.183.233
討論串 (同標題文章)
Biology 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章