Re: [問題] 關於利用P. pastoris表現的問題?

看板Biology (生物學)作者vixen (2tp27t)時間18年前 (2007/12/03 18:09)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《xmanxpower (188)》之銘言： : 【問題】：關於利用P. pastoris表現的問題? : 【問題起因】： : 問題一、 : 我看protocol上說明 : 當要表現重組蛋白時 : 菌要先活化到OD600=2~6 : 然後離心去除上清液後 : pellet要用broth回溶至OD600=1 雖說OD值不怎麼線性, 但是你可以用來勉強參考一下. 比方你的菌液是1000ml, OD=0.6, 你離心除去上清液後, 用600ml回溶pellet, 得到的菌液就比較"近似" OD1 (1000mlx0.6OD=600mlx1.0OD) 不放心的話, 就再測OD在調整一下. 建議先以500ml回溶, 再慢慢加多一點即可. : 然後培養 : 我想問回溶到OD600=1是怎麼做的？？這一步驟 : 還需要注意啥事項嗎？ : 問題二、 : 在培養後 : 每24小時都要添加甲醇誘導 : 請問一下甲醇添加的量可以過量嗎？我有看過加到2％ : protocol是寫添加到final conc.為0.5% 我以前在使用pichia系統表現時, 我的蛋白質並不會因為添加更多的甲醇而產量更多. 因人因基因而異, 你真的想知道的話, 就做個titration吧. 記得這個問題與你選的那兩個promoter有關. : 問題三、 : 在培養Pichia時 : 請問1 Liter的三角搖瓶最多裝多少broth? : 搖瓶底部是有凹槽？還是平底的就好？我選擇有凹槽的. 蓋translation需要的NTP頗多, 據說花去細胞1/3以上的能源, 為了菌與你的快樂, 建議多給些空氣為佳, 我是照樣採用1/5的比例. : 謝謝 : 可直接回信到我的ID : 感恩 : 【個人看法】：現在PO版要給個人看法? 好吧, 我的個人看法是, pichia系統開始用MeOH誘發時, 味道蠻香的, 微綠的汁液配上MeOH與酵母的特有芬芳, 會聯想到奇異果雞尾酒所以別在肚子餓時做這個實驗. :) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.208.61.15