Re: genomic DNA

看板Biology (生物學)作者transmore (小次郎)時間17年前 (2008/05/31 20:59)推噓3(3推 0噓 2→)

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※ 引述《enzymesmini (miniya)》之銘言： : ※ 引述《enzymesmini (miniya)》之銘言： : : 想請問一下?為什麼我抽RNA的時候都會抽到genomic DNA : : 那有 : : 什麼方法可以不抽到genomic DNA... : : 謝謝숡! : 我是使用樹的嫩葉,放入液態氮再將嫩葉磨成粉..加入RNA Extraction buffer+ : B-Mercaptoethanol(B是bata的意思)...混合好放入水浴(65度)加熱.... : 加入等量的Chlorofrom,拿去離心8000rpm. 15分.........取上清液 : 再加入等量的Chlorofrom,拿去離心......取上清液後加入Lithium chloride.. 加LiCl之前可以先加等體積的isopropanol (先放-20度冰個兩小時以上的效果比較好) 這時候如果有透明.團狀的東西出現可以拿勾子把它勾出來這團鼻涕就是genomic DNA 之後冰-20兩個小時~O/N 然後離心取pellet : .放4度冰箱...放一晚,... : 隔天在拿去4度離心8500rpm..10分....在加入DEPC water+Chlorofrom..... : 拿去離心8500rpm...10分.....取上清液.... : 加入NaOAc跟99.5%EtOH後放入-80度冰箱放30min......再拿去離心4度12000rpm..10分 : ...倒上清液.. : .加入75%EtOH...離心4度12000rpm..10分...此步驟再重複一次.. : 離完..將它放在冰上..要將酒精晾乾.....再用用DEPC water回溶.... : 之後就拿去跑膠了....然後我跑出來的有RNA的band...跟genomic DNA..的band..... : 因為我不要genomic DNA....想請問要怎麼樣才不會有??......謝謝.... 後面的步驟可以再加DNase以及protease處理然後用phenol/chloroform去除DNase.protease 這樣應該就可以了我是抽山藥塊莖的RNA 做法大概是加extraction buffer之後以phenol/chloroform處理兩次再以chloroform處理一次然後加isopropanol並勾掉genomic DNA 再以LiCl沉澱兩次然後就是酒精鹽沉澱以及洗鹽基本上很少抽到蛋白或是DNA 連放DNase及protease都沒必要 -- 我，我是掙扎了很久才決定打這通電話給你我不管你對我什麼樣的看法我還是決定要跟你分手原先我以為我是被夾在幸福和痛苦之間後來發現我是排在幸福和痛苦之外雖然追求的本身就是一種收穫付出的意義就是一項取得我寧可斷不可亂也不願剪不斷理還亂我要跟你一刀三斷！欸小姐！你打錯電話了。那，那我不管，你也一樣，你們男人都一樣，賤！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.132.51.146