Re: [問題] zebrafish vibratome section 切的時候 …

看板Biology (生物學)作者jeff31303 (大師濕屍獅蝨虱螄鰤~~~~~)時間16年前 (2009/09/23 11:17)推噓0(0推 0噓 0→)

留言0則, 0人參與討論串1/2 (看更多)

※ 引述《tao80569 (小秋)》之銘言： : 【問題】： : 切片條件跟PAPER上的都相同連儀器都一樣但是切的時候SAMPLE不斷的破損 : yolk部分都變成空心的只剩下最外圈或是整個都掉下來有方法改善嗎 : 【問題起因】： : 之前切的時候都是切3-4天所以已經沒有yolk的問題都是完整的 : 但是現在要切34H的時候切了十多片只切出一片 : 外觀完整但是yolk空心甚至整個都掉 : 前處理是34H的zebrafish用 2% PFAT FIX o/n 然後包埋在 : 2% agarose 在cold PBS中用vibratome切片初步看起來是固定不完全，或是酒精置換不完全所導致的包埋不完全。如果發育3~4天可以切的出來，但34h不行，最可能的原因是因為胚胎發育比較早期時，結締組織纖維還未製造完全，組織整體來說強度較弱。因此解決方法可能是加強 PFA 溶液濃度，提高到 4% PFA 4度C O/N 或 R.T. 4h Triton 可加可不加。另外，提高組織酒精置換時間。先前如果每一步驟僅用10分鐘，則提高到30分鐘；若之前用30分鐘，則提高到 1h。還有，絕對不要忘記 100% EtOH + Xylene 1:1 這步，這是讓 Xylene 能完全置換的關鍵步驟。 : paper的可以切到16H都還非常完整 : 所以說這是可以切出來的 : 【個人看法】： : paper中是切250 我們切200 UM : 厚度只差一點不知道會不會有影響 : 而刀片我們用的是一般的鍋鬍刀那種雙面剃刀 : 刀面不知道是否會影響刀片如果夠銳利，一般不會有影響。反而是刀片的傾斜角 tilting angle 比較值得注意。可以試試看與組織切片盡量垂直。網路上查 tilting angle 就有許多資訊，不再贅述。 : 之前切的四天200的染IHC就有點滲不進去 : 有點不敢再更厚先想辦法處理yolk掉落的問題 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.59.123