Re: [問題] zebrafish vibratome section 切的時候 …
※ 引述《jeff31303 (大師濕屍獅蝨虱螄鰤~~~~~)》之銘言：
: ※ 引述《tao80569 (小秋)》之銘言：
: : 【問題】：
: : 切片條件跟PAPER上的都相同 連儀器都一樣 但是切的時候SAMPLE不斷的破損
: : yolk部分都變成空心的 只剩下最外圈 或是整個都掉下來 有方法改善嗎
: : 【問題起因】：
: : 之前切的時候都是切3-4天 所以已經沒有yolk的問題 都是完整的
: : 但是現在要切34H的時候 切了十多片只切出一片
: : 外觀完整但是yolk空心 甚至整個都掉
: : 前處理是34H的zebrafish用 2% PFAT FIX o/n 然後包埋在
: : 2% agarose 在cold PBS中用vibratome切片
: 初步看起來是固定不完全，
: 或是酒精置換不完全所導致的包埋不完全。
: 如果發育3~4天可以切的出來，但34h不行，
: 最可能的原因是因為胚胎發育比較早期時，
: 結締組織纖維還未製造完全，組織整體來說強度較弱。
: 因此解決方法可能是加強 PFA 溶液濃度，
: 提高到 4% PFA 4度C O/N 或 R.T. 4h
: Triton 可加可不加。
: 另外，提高組織酒精置換時間。
: 先前如果每一步驟僅用10分鐘，則提高到30分鐘；
: 若之前用30分鐘，則提高到 1h。
: 還有，絕對不要忘記 100% EtOH + Xylene 1:1 這步，
: 這是讓 Xylene 能完全置換的關鍵步驟。
我目前採用的FIX是PBS wash後放入2%PFAT o/n
依照之前老師給的方法
o/n之後直接就包埋到4%的AGAR裡面
沒有再進行WASH的動作
所以沒有用到EtOH
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.195.134
討論串 (同標題文章)
Biology 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
12
26