[求救] Raw細胞分化成 OC
※ [本文轉錄自 Biotech 看板]
作者: JoyHuang (不想改...) 看板: Biotech
標題: [求救] Raw細胞分化成 OC
時間: Thu Oct 29 17:09:33 2009
最近實驗要開始做將 RAW 264.7 分化成 osteoclast 細胞的實驗。
根據paper所敘述，加入 RANKL 50 ng/mL 處理五天後，
染 TRAP 若看到三核即為 osteoclast
第一次實驗細胞數量沒抓對，五天處理下來，細胞數量爆高。
相互堆疊，造成辨認的困難。
第二次實驗將細胞數減至1/4 ，五天處理下來，細胞大約只佔了整個well的不到五成。
而且並沒有觀察到有比較大的細胞產生（因為osteoclast是三核，應該會比較大顆）
對於positive control竟然沒有分化現象出現，想上來求救一下。
看板上是否有其他人實驗室曾做這種實驗，希望可以求教！
另外，染TRAP部分。因為我們把細胞種在 24 well中處理，
TRAP染色也是直接把染劑丟進去。
卻發現這樣無法使用高倍的倒立式顯微鏡觀察。
請問其他人是怎樣處理種在well中的細胞呢？
應該去找正立高倍的顯微鏡？或是有其他方法可以處理？
謝謝
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