Re: [問題] RNAi in vivo
※ 引述《datro (事在人為，非環境為)》之銘言：
: ※ 引述《zamki (林小布)》之銘言：
: : 聽說RNAi也頗燒錢的......
: : 麻煩有哪位才子才女跟我說明一下可以嗎........^^
: 之前才聽到國衛院的老師說過RNAi
: 果真是燒錢的東西。
: 好像一個RNAi kit? 15000。
1. 如果只是訂購RNA neucleotide, 自己anneal再transfect進細胞,
非常燒錢, 以一個基因踹4段來說, 隨便就上萬. Dharmacon
賺你的錢也很狠, 這份文件RNAi Technical Reference & Application Guide
現在是免費的, 趕快去申請...厄, 我知道美國是免費, 我不知道台灣啦.
http://www2.dharmacon.com/RNAiGuide?source=0
2. 這麼好賺的市場當然不可能全由Dharmacon獨享, 所以其他很多家
眼紅, 會推出不同方式的也要分食大餅, 比方Invitrogen採用
很長一段DNA-->RNA, Dicer in vitro process之後把片段全部transfect
進細胞, 通殺, 胡了!! 最好禱告這基因不會跟其他基因序列相似.
請進invitrogen.com搜尋BLOCK-iT Dicer RNAi Transfection kit
或stratagene的recombinant Dicer/GeneEraser
3. 以上兩種方法都是暫時的, 要stable的話, 另一種方法是在細胞內直接表現
short hairpin RNA片段, 有用retrovirus的, 也可以用lentivirus
(如果你的細胞cell cycle不走的話, HIV是你的選擇), 比方BD/clontech
的pSiren系列與Invitrogen的Lentiviral RNAi system. 我個人的感覺是,
成功率與否除了跟目標序列有關外, 跟cell line種類也很有關係.
4. 請大家密切注意silencing library, 運氣好的話就不用自己做silencing了.
省很多力氣, 一般不那麼co的商用公司都會提供已經work的序列, 比方Qiagen
http://www1.qiagen.com/Products/GeneSilencing/LibrarySiRna/
5. 兩三年之前pSuper與pSHAG兩家實驗室對拼stable silencing的時期, 就已經
試過培養中的cell line抑制hepatitis病毒蛋白表現了, 流感這篇文章是
整隻老鼠應該比較有趣, 祝各位成功踏平一切基因.
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