Re: 螢光免疫染色
※ 引述《HIbaby (嗨北鼻)》之銘言：
: : 可是物鏡頂多只到100x
: : 要怎麼看的到清楚的mitochondria??
: 請問一下 利用抗體做螢光免疫觀察 要怎樣提高良好的訊號
: 比方說 該亮的要亮 背景就是背景?
: 前一陣子 不斷的一抗二抗泡 才增加點靈敏度 但這應該不是辦法..-_-;;
提高訊雜比或噪訊比(Signal to Noise ratio)是很tricky的問題
螢光顯微術在硬體上、軟體上有些方法可以做enhance 在此先不贅述
針對抗體染色 最常碰到染不好的原因就是
1. Wash不夠乾淨 使得溶液中有點晦晦亮亮的
2. 抗體的specificity不夠好 亂黏東西以致於非target也會出現訊號
3. 染色時間不恰當 染太快會降低螢光訊號 染太久會讓抗體亂黏
其中第2和第3點 個人的經驗是會特別take care在1抗上
比起來2抗的性質比較不會bind到unwanted target
關於此類specificity的問題 適當的blocking步驟可以改善許多
至於用以block的蛋白和濃度也需要一些經驗
胎牛血清蛋白(BSA)是用得最廣泛的 濃度常在2~5% 如果太濃的話
可能aggregation到連抗體都會被遮住
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※ 編輯: keku 來自: 140.109.214.254 (11/15 22:50)
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