Re: 螢光免疫染色

看板Biotech (生命科學)作者vmp (邪惡系美少女ＫＪ)時間20年前 (2004/11/15 15:17)推噓2(2推 0噓 1→)

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※ 引述《keku (月光下輕舞)》之銘言： : : 前一陣子不斷的一抗二抗泡才增加點靈敏度但這應該不是辦法..-_-;; : 提高訊雜比或噪訊比(Signal to Noise ratio)是很tricky的問題 : 螢光顯微術在硬體上、軟體上有些方法可以做enhance 在此先不贅述在硬體上，最為大家所熟知的工具，就是Confocal， Confocal的基本原理，大家應該略有耳聞，這裡就先跳過這項工具。要提到用軟硬體改善螢光的呈現，就要先提到光的特性。請大家想像一下，當一個「點」發光時，除了中心最亮的一點之外，在點的Y方向，會呈現上下兩個漏斗狀 \./ / \ 大概像這樣......=.= 在立體當中，有很多這樣的漏斗狀太接近，或互相重疊下，就會在螢光顯微鏡中看到「一坨」亮亮霧霧的螢光。這在一般螢光顯微鏡中是無法避免的。（不然也不用去用confocal啦~）光點會呈現上下漏斗這樣的特性，可以用一個叫作PSF（point spread function)函數來作運算。這樣的運算工具，在很多生物影像分析軟體中都有，這個功能叫作「3D deconvelusion」例如Metamorph、IPP（image pro plus) 或是在各單位採買的顯微鏡附屬軟體中都可以找到這樣的功能。（不過這個功能都是要加錢才能買到）大家有興趣的話，可以參考下列網站： MetaMorph http://www.image1.com/products/metamorph/ IPP（Image-Pro plus） http://www.mediacy.com/ipp/imageproplus.htm Zeiss http://0rz.net/8002Y Leica http://www.leica-microsystems.com/website/lms.nsf 講這麼多，不如讓大家看一下，經過3D deconvolusion運算的結果： http://www.image1.com/products/apps/3ddecon.cfm 不過經過軟體內寫好的公式運算的結果，還是有那麼一點讓人不放心，再說，同一套軟體內，就可能同時存在兩種以上不同的運算公式，套用不同的公式時，可能還有實驗設計或記錄上問題。如果能從硬體上做出影像澄清的效果，還是比較直接爽快。不過目前能從硬體上做出這樣效果的，除掉confocal不說，大概只有Spinning disc和Apotome Spinning Disc(PerkinElmer）： http://www.uib.no/med/mic/equipment/UltraView-RS/UltraView-RS.html Apotome原理：（點選網頁右側其他連結，可看Apotome處理結果） http://0rz.net/4e02T 有利用到Apotome工具的已發表paper（找一篇大家都可以免費閱讀的） http://www.biomedcentral.com/1471-2121/5/31 另外，清大江安世老師研發出的FocusClear藥品，好像也有使影像澄清的作用，這部分並沒有深入找資料啦~ http://magazines.sina.com.tw/bioera/contents/200405/200405-001_7.html （只看了這個）希望有用過FocusClear的同學們，能聊一下啦~ 用法、使用範圍、心得.....還滿想知道這個藥品在市面上銷售和使用情形。 -- ******** ＰＴＴ貴重儀器中心Ｂiotech 　　　　　ＫＪ ******** -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.35.20.159 ※ 編輯: vmp 來自: 218.35.20.159 (11/16 00:26)