Re: [問題] 關於Clone的問題.

看板Biotech (生命科學)作者kkyeh.時間19年前 (2006/02/27 11:58)推噓3(3推 0噓 0→)

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※ 引述《intotheman.bbs@ptt.cc (花草盒子)》之銘言： > ※ 引述《dreamcity (飛行在宇宙中的航海者號)》之銘言： > : 各位好,小的是一個小碩一, > : 我有兩個基因片段要clone起來做定序, > : 但是這兩個都不太小,一個2.8K,另一個3K. > : 我用實驗室裡的cloning Kit試過好幾次了,一直失敗. > : 老師也一直說不要亂做浪費錢(他X的我完全照protocol.....) > : 請問各位有什麼好方法幫幫我吧!! > : 另外再請教,做完transformation後把plate放O/N, > : 隔天看plate上滿滿的都是菌落,代表什麼意思? > : 要一個一個挑起來篩選嗎? > : PS: > : Cloning system: > : 1. GeneMark pOSI-T Cloning Kit, 用的是Kit附的勝任細胞. > : 2. TOPO TA Cloning Kit(PCR-II cloning vector), 用的是實驗室的勝任細胞(DH5α) > sorry 你說的要先clone定序，是說只要訂這兩個片段嗎? > 如果是的話，直接用rtTH做PCR片段，再用Topo做藍白篩選，再用vector上的primer去定序 > 不過接近3K大小的片段，不好送進vector裡面，記得要將transformation完的 > 菌液離下來全塗到盤上(IPTG/X-Gal)再挑白色的起來check吧 > 如果是要做subcloning接上去的話,請愛用gel-extration kit確保DNA片段的清潔可以順便請教一下因為我們老師說如果要用gel elution的話要純化的DNA片段最好不要染EtBr 會造成到時候mutation 可是真的慧那麼嚴重嗎?? 每次都用對照切下來老實說有點心驚膽跳怕沒切到 -- ╭─ Origin ─╗ 新綠園 bbs.sa.ncyu.edu.tw ～ κλμ ─┤ ├ Author ╡ art189.ncue.edu.tw