Re: [問題] 關於Clone的問題.

看板Biotech (生命科學)作者dreamcity (飛行在宇宙中的航海者號)時間19年前 (2006/02/28 09:37)推噓2(2推 0噓 0→)

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※ 引述《intotheman (花草盒子)》之銘言： : ※ 引述《dreamcity (飛行在宇宙中的航海者號)》之銘言： : : 各位好,小的是一個小碩一, : : 我有兩個基因片段要clone起來做定序, : : 但是這兩個都不太小,一個2.8K,另一個3K. : : 我用實驗室裡的cloning Kit試過好幾次了,一直失敗. : : 老師也一直說不要亂做浪費錢(他X的我完全照protocol.....) : : 請問各位有什麼好方法幫幫我吧!! : : 另外再請教,做完transformation後把plate放O/N, : : 隔天看plate上滿滿的都是菌落,代表什麼意思? : : 要一個一個挑起來篩選嗎? : : PS: : : Cloning system: : : 1. GeneMark pOSI-T Cloning Kit, 用的是Kit附的勝任細胞. : : 2. TOPO TA Cloning Kit(PCR-II cloning vector), 用的是實驗室的勝任細胞(DH5α) : sorry 你說的要先clone定序，是說只要訂這兩個片段嗎? 是的 : 如果是的話，直接用rtTH做PCR片段，再用Topo做藍白篩選，再用vector上的primer去定序 : 不過接近3K大小的片段，不好送進vector裡面，記得要將transformation完的 : 菌液離下來全塗到盤上(IPTG/X-Gal)再挑白色的起來check吧 : 如果是要做subcloning接上去的話,請愛用gel-extration kit確保DNA片段的清潔請問subcloning是指用degenerate primer做PCR後,切下所要的片段大小的gel, 經過gel elution後做cloning嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.149.12