Re: 請問silver stain的問題

看板Biotech (生命科學)作者aggaci (有氣質的台客)時間19年前 (2006/04/19 20:03)推噓2(2推 0噓 1→)

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※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之銘言： : ※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言： : : 請問一下 : : 最後silver stain時 : : 加silver 反應 20min : : (為什麼這一步會整片PAGE變的黃黃的??) : : 之後用水迅速地洗兩遍之後 : : 再以develop buffer將銀還原呈色 : : 這一步一加下去，整片PAGE背景又更深了(差不多develop 1分鐘左右而已) : : 跟昆布一樣 : ^^^^ 真貼切的形容詞 >< : 我覺得你要不要把整個silver stain protocal放上來讓大夥看看? : 至少我身邊3間實驗室各自的銀染手法都不太一樣 : : 為什麼會降子呢? : : 是玻璃盆的問題嗎(我只用二次水洗過，有人說得用強酸洗過) : 這沒關係，我的染盆是多用途的咧，染Commassie blue、做western、銀染 : 都用同一個 XDDDD : : PAGE不是該是乾淨透明無色的嗎? : : 這樣真的很醜 : 我自己的撇步啦，formaldyhyde多放一點，大概多個15~20%吧 : 這樣呈色速度快一點的話或許可以避免你上述的「昆布效應」 :p 真的嗎?? 沒什麼副作用嗎? : : 有沒有什麼辦法能改善呢? 謝謝 : 我猜是因為在AgNO3後的水喜步驟不夠乾淨 : 所以有殘留的銀在PAGE上，導致Na2CO3呈色時Ag的顏色就跑出來了歐可是我在加硝酸銀的那一步就有黃色的background了呢我看別人都不會阿~ 我的步驟是 1. 50 ml actetic acid + 200 ml methanol + ddH2O 250 ml 2hr 2. 160 ml methanol + 1.6g sodium thiosulfate + 34 g sodium acetate 30min 3. 500 ml ddH2O 5 min*3 4. 1.25 g silver nitrate/500 ml ddH2O 20min 5. 500 ml H2O wash 1min*2 6. 12.5g sodium carbonate + 200 ul formadehyde/500 ml ddH2O 4min~10min 7. 6g EDTA 10min 8. 500 ml ddH2O 奇怪我有看到在第4步有人會加formadehyde的降子銀不會被提早還原嗎??? 對了!謝謝您的回覆嚕 -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165