Re: 請問silver stain的問題

看板Biotech (生命科學)作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)時間19年前 (2006/04/19 21:52)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言： : ※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之銘言： : : ^^^^ 真貼切的形容詞 >< : : 我覺得你要不要把整個silver stain protocal放上來讓大夥看看? : : 至少我身邊3間實驗室各自的銀染手法都不太一樣 : : 這沒關係，我的染盆是多用途的咧，染Commassie blue、做western、銀染 : : 都用同一個 XDDDD : : 我自己的撇步啦，formaldyhyde多放一點，大概多個15~20%吧 : : 這樣呈色速度快一點的話或許可以避免你上述的「昆布效應」 :p : 真的嗎?? : 沒什麼副作用嗎? : : 我猜是因為在AgNO3後的水喜步驟不夠乾淨 : : 所以有殘留的銀在PAGE上，導致Na2CO3呈色時Ag的顏色就跑出來了 : 歐可是我在加硝酸銀的那一步就有黃色的background了呢 : 我看別人都不會阿~ : 我的步驟是 : 1. 50 ml actetic acid + 200 ml methanol + ddH2O 250 ml 2hr : 2. 160 ml methanol + 1.6g sodium thiosulfate + 34 g sodium acetate 30min : 3. 500 ml ddH2O 5 min*3 : 4. 1.25 g silver nitrate/500 ml ddH2O 20min : 5. 500 ml H2O wash 1min*2 : 6. 12.5g sodium carbonate + 200 ul formadehyde/500 ml ddH2O 4min~10min : 7. 6g EDTA 10min : 8. 500 ml ddH2O : 奇怪 : 我有看到在第4步有人會加formadehyde的 : 降子銀不會被提早還原嗎??? : 對了!謝謝您的回覆嚕我的步驟： 1. 將SDS-PAGE膠片浸泡於含12% acetate和50% ethanol之fix solution內至少2小時至隔夜。 2. 倒掉fix solution以50% ethanol清洗浸泡20分鐘，重複此步驟3次。 3. 將膠體放置於含0.02% 之Na2S2O3內浸泡1分鐘。 4. 再以去離子水反覆沖洗膠體3次，每次20秒。 5. 之後將膠體置於硝酸銀溶夜中作用20~60分鐘。 (硝酸銀溶液:1g AgNO3 + 37ul 37% formaldyde, total 50ml) 6. 倒掉硝酸銀溶夜後，將膠片以去離子水反覆沖洗3次，每次30秒。 7. 然後將膠體置於developing solution 中，輕搖至蛋白質條帶呈色。 (developing soln:30g NaCO3 + 25ul 37% formaldedyde + 20ul 20%Na2S2O3, total 50ml) *通常我會放30ul 37% formaldyhyde* 8. 待呈色完畢後將膠體置於3.5% acetate中40分鐘以終止呈色反應。 9. 然後將膠體置於去離子水中輕搖以除去多於acetate。 10. 最後將膠體置於保存液中(5% glycerol和20% methanol)或以玻璃紙封片後風乾保存。 -- 大概就這樣吧 :p -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.213.101